王开梅 胡祥英 郑光强 邱文海 林志雄

    [摘要] 目的 研究外周血去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)、干扰素调控因子1(IRF1)的表达水平与支气管哮喘(BA)患儿肺功能的相关性。 方法 选择2018年1～8月在海口市妇女儿童医院(以下简称“我院”)接受治疗的84例BA患儿作为观察组，根据病情严重程度将其分为轻度组(30例)、中度组(44例)、重度组(10例)。另选同期在我院进行体检的健康儿童80名作为对照组。检测并比较各组肺功能指标及外周血ADAM8、IRF1的mRNA及蛋白表达水平，分析观察组患儿外周血ADAM8、IRF1的蛋白表达与其肺功能指标的相关性。 结果 观察组及轻、中、重度组外周血ADAM8、IRF1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组，差异均有高度统计学意义(P 0.05)，具有可比性。本研究已经我院医学伦理委员会审核及批准。

    1.2 仪器与试剂

    瑞士Roche公司生产的TRIzol(货号：15596026);瑞士Roche公司生产的蛋白裂解液(批号：161306);BECKMAN OPTIMA XPN-100超速离心机，离心半径为10 cm;日本TaKaRa公司生产的Takara反转录试剂盒(货号：638313);美国伯乐公司生产的Bio-Rad PCR儀(货号：179203);赛默飞世尔科技(中国)有限公司生产的SYBR Green Master Mix、BCA试剂盒(货号：23221);天根生化科技(北京)有限公司生产的RNase-free H2O(货号：RT121-02)、LcDNA(货号：KR202-01);购自上海联迈生物工程有限公司的ADAM8酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(货号：10548)、IRF1 ELISA试剂盒(货号：10511)。

    1.3 标本采集

    入组后晨间抽取各组受试者空腹静脉血6 mL，置入乙二胺四乙酸抗凝管内，通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心法将外周血的血清及单个核细胞进行分离，并将血清分装进200 μL的EP管中，置于-70℃冰箱中保存。单个核细胞添加200 μL TRIzol或200 μL蛋白裂解液后，置于-70℃冰箱中保存。

    1.4 荧光定量PCR法测定ADAM8、IRF1的mRNA表达

    通过TRIzol法将外周血中单个核细胞的总RNA予以提出 ......