张娟 赖春田 王海燕 邹闻达 彭娟 朱力宇 李辉

    [摘要] 目的 探討重型α-地中海贫血胎儿羊水源诱导多能干细胞的建立及鉴定。 方法 对胎儿被诊断为重型α-地中海贫血(--SEA/--SEA)的孕妇(16+周)进行超声引导下羊膜腔穿刺术，抽取10 mL羊水。利用非整合型仙台病毒介导Sox2、Klf4、c-Myc、Oct 3/4 四种转录因子将重型α-地中海贫血胎儿的羊水细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPSCs);通过碱性磷酸酶(ALP)染色，免疫荧光标记(IF)检测等对iPSCs进行多能性鉴定;通过拟胚体(EB)的形成和自发分化实验对iPSCs在体内外3个胚层细胞分化的能力进行鉴定;同时进行细胞核型分析及缺失型α-地中海贫血基因诊断。 结果 仙台病毒可以成功地将重型α-地中海贫血胎儿的羊水细胞重新编程为非整合型诱导性多能干细胞(h-AF-SeV-iPSCs);ALP染色呈强阳性;IF检测显示Sox2、Oct4、SSEA-4、Tra-1-81表面特异性蛋白表达为阳性;h-AF-SeV-iPSCs悬浮培养均能形成囊性EB，贴壁培养后3个胚层均能分化;h-AF-SeV-iPSCs第10代及第20代细胞染色体核型均为正常核型(46，XY);且h-AF-SeV-iPSCs及其原代羊水细胞的重型α-地贫基因检测均为--SEA/--SEA缺失型。 结论 h-AF-SeV-iPSCs可作为研究重型α-地中海贫血胎儿宫内治疗的理想细胞模型，羊水细胞可作为iPSCs的理想细胞来源。

    [关键词] 重型α-地中海贫血;羊水细胞;诱导多能干细胞;仙台病毒

    [中图分类号] R714.5? ? ? ? ? [文献标识码] A? ? ? ? ? [文章编号] 1673-7210(2019)09(c)-0018-06

    Establishment and identification of induced pluripotent stem cells sourced fetal amniotic fluid cells of a fetus with severe α-halassemia ......