陈远群 谌 平 陈国创 韦枝红

    1.深圳大学第一附属医院深圳市第二人医院妇科，广东深圳 518035；2.中国科学院深圳先进技术研究院，广东深圳 518055；3.广东省深圳市宝安区人民医院(原深圳大学第一附属医院深圳市第二人医院)妇科，广东深圳 518101

    卵巢癌是妇科恶性肿瘤死亡率最高的一种[1-2]，其高死亡率除了因早期发现困难，更重要是其晚期化疗效果不佳[3-4]。大多数卵巢癌细胞在经历铂类等细胞毒性药物治疗后，均出现优势克隆适应性进化[5-7]，耐药性的出现。因此，我们急需建立一种有效、安全的卵巢癌晚期治疗方案，单克隆抗体疗法中的双特异性T 细胞衔接器(BiTE)的独特功能为妇科肿瘤免疫治疗中明星分子[8-10]。本实验主要选择靶向上皮细胞黏附分子(EpCAM)，作为卵巢癌细胞特异的上皮黏附因子及T 细胞特异黏附因子CD3，作为BiTE 的两个特异抗体。采用非病毒载体微环DNA 表达系统获取蛋白。观察抗EpCAM 加抗CD3 双特异BiTE 分子蛋白(抗EpCAM/抗CD3 BsAb)对诱导T 细胞特意杀伤卵巢癌细胞的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要仪器及试剂

    化学发光成像系统(Bio-red，美国)；倒置生物显微镜(OLYMPUS，日本)；Bright-GloTM萤光素酶检测系统(Promega，E2610)；分选型流失细胞仪(BD Cano Ⅱ)；动态光散射粒径测试仪(Malvern，英国)；荧光倒置显微镜(Nikon，日本)；Anti-6*His tag antibody(Abcam，美国)；蛋 白显影液(Cell Signaling，美国)；PVDF 膜(Millipore，美国)，anti-rabbit IgG(Cell Signaling，美国)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 抗EpCAM/抗CD3 BsAb 的制备 采用X-treme-GENE HP DNA transfection reagent 和表达载体SZ-90 EpCAMxCD3 瞬时转染HEK293 细胞 ......