lncRNA PANDAR 对宫颈癌细胞、耐受细胞顺铂敏感性的影响
亲本,孵育,存活率,1材料与方法,1主要试剂,2细胞的培养,3耐药细胞株HeLa-DDP的建立,4PANDAR过表达载体的构建及转染,5LV-sh-PANDAR的感染,6qRT-PCR检测PA
朱 骞 张 玲 袁 鹏 李 郁 张 潍 杨 红1.空军军医大学第一附属医院西京医院妇科,陕西西安 710032;2.西北妇女儿童医院妇一科,陕西西安 71006;3.西北妇女儿童医院妇科内分泌科,陕西西安 710061;4.空军军医大学生化教研室,陕西西安 710032
宫颈癌是女性第二大恶性生殖系统肿瘤,致死率位居世界第四[1],晚期患者预后1 年存活率仅为10%-20%[2]。化疗是目前宫颈癌患者术后延长生命的主要辅助治疗方式,顺铂(Cisplatin,DDP)是常见化疗药,但其耐药性的出现使得宫颈癌的治疗效果并不理想[3-5]。LncRNA CDKN1A 反义链启动子DNA 损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)近年来被证实与多种肿瘤的进展及预后相关,已成为肿瘤领域研究的热点分子。研究发现,PANDAR 高表达可促进结直肠癌生长及转移[6],还可作为我国癌症患者预后不良指标[7]。此外,PANDAR 与胃癌TNM 分级、肿瘤转移、化疗耐受息息相关[8]。但是,其在宫颈癌化疗耐受中的作用尚不明确。本研究拟构建宫颈癌耐受细胞HeLa-DDP,分析PANDAR 对宫颈癌亲本细胞及耐受细胞顺铂敏感性的影响,从而为宫颈癌的化疗耐受提供新的治疗策略。
1 材料与方法
1.1 主要试剂
人宫颈癌HeLa 细胞购自上海拜力公司;顺铂购自Sigma 公司(批号:1763258);CCK-8 试剂盒购自上海碧云天生物技术公司(批号:C0038);Annexin VFITC/PI 凋亡试剂盒购自南京建成生物工程研究所(批号:20180415);一链cDNA 合成试剂盒购自Invitrogen 公司(批号:00743856);实时荧光定量试剂盒购自宝生物工程大连有限公司(批号:11756);LV-sh-PANDAR 慢病毒载体购自和元生物技术(上海)股份有限公司 ......
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