王阿美 张 睿 刘文兰

    首都医科大学中医药学院，北京 100069

    乙型肝炎病毒(HBV)感染可导致多种肝病，包括慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC)[1]。研究显示[2-4]，各种肝病的发生、发展与氧化损伤密切相关，DNA 氧化损伤可能是肝病的共同发病机制。DNA 发生氧化损伤后，为了维持基因组的完整性和稳定性，机体会启动一系列DNA 损伤修复反应，通过阻滞细胞周期对DNA 进行修复[5]。而一贯煎具有抗氧化能力，可保护细胞和组织免受活性氧的危害[6-8]。前期研究结果提示，一贯煎治疗慢性肝损伤的药理机制与抑制活性氧(ROS)从而减轻DNA 损伤有关，肝细胞氧化损伤产生大量ROS，与DNA 损伤也有密切关系，但具体机制尚不清楚。因此，探讨一贯煎修复DNA 氧化损伤是否能够提高人正常肝细胞抵御氧化损伤的能力，具有重要的科研意义和临床价值。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与动物

    人正常肝细胞(L02)，第15 代，购自北京普京康利科技有限公司，品牌为keygen 凯基生物，批号为：KG063。雄性Sprague-Dawlay 大鼠40 只。体重180～220 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号SCXK(京)2016-0011，合格证号：114007 00375946。饲养于首都医科大学实验动物科学部20～25℃室温、湿度50% SPF 级动物室。普食喂养，自由饮食。本研究经首都医科大学动物实验及实验动物福利委员会审批同意。伦理编号：AEEI-2018-036。

    1.2 药物及试剂

    原方出自清代魏之绣著的《柳州医话》，功用滋阴疏肝，主治肝肾阴虚，肝郁气滞证[9-10]。于北京同仁堂药店选购标准中药材，北沙参9 g、麦冬9 g、当归9 g、生地黄20 g、枸杞子12 g、川楝子4.5 g，将饮片置煎煮容器内，加药材量约6 倍的冷水浸泡1 h，煮沸30 min，过滤并收集滤液。药渣加3 倍量水继续煎煮，煮沸20 min，过滤并收集滤液，将2 次滤液合并为一贯煎浓缩液，待冷却后装入灭菌药瓶中，于4℃冰箱中保存备用。

    DMEM 培养基(Corning，10-013-crv)，PBS(Corning，21-040-cvr)，胎牛血清(Gibco，1932597)，H2O2(北京中杉金桥生物技术有限公司，ZLI-9311)，Vc(Sigma，SLBN3833V)，CCK-8 试剂盒(DOJINDO，LB622)，细胞周期试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司 ......