国家呼吸系统疾病临床医学研究中心生物样本库专家组

    生物样本作为基础及临床研究的宝贵资源，对推进临床诊疗能力、提高精准医学研究水平都具有重要的现实意义[1]。我国呼吸系统疾病生物资源库建设尚处于初级阶段，普遍缺乏标准化操作流程[2]。除通用样本，例如血液、尿液、手术病理组织外，呼吸系统疾病特有样本还包括痰液(包括诱导痰)、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液(BALF)、咽拭子浸液、支气管黏膜活检组织以及针刺活检组织等。同时，还应注意感染性疾病样本具有传染性。因此，样本采集和保藏时应区别对待，并遵循相应标准操作规程。本文重点阐述呼吸系统疾病生物样本采集、保藏、管理技术标准和规程。

    1 标准操作规程

    生物样本采集保藏应遵循的流程[3]：①知情同意。②登记临床信息，打印条码。③采集样本。④入库前处理。⑤入库登记。⑥入库储存。⑦管理、质控。⑧申请出库、科学研究。

    1.1 血液样本采集和保藏

    1.1.1 准备

    运输箱、采血针，真空采血管。常用采血容器用途见表1。

    表1 常用采血管用途

    1.1.2 采集

    抗凝管、非抗凝管各1 管(5 mL)。

    1.1.3 处理

    1.1.3.1 血浆 ①分离：离心力815 g，10 min，4℃。②提取：取上清液。③二次离心：离心力2500 g，10 min，4℃。④分装：取上清液[4]。

    1.1.3.2 血清 ①凝血：30 min，室温。②离心：离心力1500 g，10 min，4℃。③分装：取上清液[4]。

    1.1.3.3 血凝块 ①分离：分离血清。②混匀：无菌玻璃棒混匀。③分装：2 支冻存管(血凝块体积1 cm3)[5]。

    1.1.3.4 白细胞 ①分离：a)预热：淋巴细胞分离液、RPMI1640 培养液至室温。b)提取：加入RPMI1640(1∶1)。c)铺血：加入淋巴细胞分离液(3 mL)。d)离心：离心力450 g，30 min，室温。e)吸取：白膜至5 mL 磷酸盐缓冲液(PBS)离心管。f)离心和洗涤：离心力450 g，1 min，室温；弃上清液，加入5 mL PBS 再次洗涤、离心。②程控降温仪处理：a)混匀：弃上清液，加冻存剂保护液3 mL。b)分装：3 支冻存管中(每支1 mL) ......