李晓青 李建州 杨 英 李兰娟

    1.西安交通大学第一附属医院急诊科，陕西西安 710061；2.西安交通大学第一附属医院感染科，陕西西安 710061；3.浙江大学传染病诊治国家重点实验室，浙江杭州 310003

    人工肝支持系统是目前临床治疗肝衰竭的最重要手段之一，而以培养肝细胞为基础的生物人工肝(bioartificial liver，BAL)是其中的研究热点[1-3]。BAL 理论上可以完全替代肝脏的合成、代谢解毒等生物学功能，国内外已有多个BAL 系统进入临床试验阶段，但初步的研究结果并不理想，其核心问题是无法获得足够数量的高活性、功能良好的肝细胞[4-6]。肝细胞是BAL 的核心成分，BAL 对肝衰竭的治疗作用主要取决于反应器中的肝细胞。但肝细胞在常规的二维培养方式下呈平面生长，不利于维持其增殖活性和生物学功能，无法满足BAL 对细胞源的要求。而三维培养技术能够为肝细胞提供类似于肝小叶的微环境，显著提高细胞的增殖、分化和活性，有力地弥补了二维培养的不足[7-9]。本研究拟采用海藻酸钙微囊制备技术，构建一套微囊流化培养系统，探讨微囊流化培养对C3A细胞功能的影响及其分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验用细胞系及主要试剂

    C3A 细胞系购自美国标准生物品收藏中心；高糖DMEM 培养基(货号：11995065)、胎牛血清(货号：10099-141)购自美国Gibco 公司；制作微囊应用海藻酸钠(货号：A2033)购自美国Sigma-Aldrich 公司；制作破囊液用柠檬酸三钠(货号：10019418)购自上海国药集团化学试剂有限公司；FDA(货号：F1303)、PI(货号：P3566)荧光染料购自美国Invitrogen 公司；MTT 试剂盒(货号：11465007001)购自瑞士Roche 公司；白蛋白定量试剂盒(货号：E80-129)购自美国Bethyl Laboratories 公司；尿素定量试剂盒(货号：EUR3-100)购自美国BioAssay System 公司；Trizol 试剂(货号：A33250)购自美国Invitrogen 公司；CYP3A4 活性定量试剂盒(货号：V9002)、CYP1A2 活性定量试剂盒(货号：V8752)购自美国Promega 公司；荧光定量PCR试剂盒(货号：DRR036A)购自日本TaKaRa 生物株式会社；CYP1A2(货号：ab56073)、CYP2E1(货号：ab53945)、CYP3A4(货号：ab124921)、CYP3A5(货号：ab108624)一抗抗体购自上海艾博抗贸易有限公司；蛋白激酶A(protein kinase A ......