谭晓谦 梅海波 伍江雁 严 安

    湖南省儿童医院骨科，湖南长沙 410007

    骨肉瘤是骨肿瘤中常见的一种恶性肿瘤，具有侵袭性极高、恶性程度高、预后不良等特点，超过15%的患者在确诊时已经发现有远处转移[1-3]。骨肉瘤的治疗主要以手术切除和手术期化疗为主，其中未发生远处转移的骨肉瘤患者的5 年生存率高达70%，但是转移性和复发性骨肉瘤患者的5 年生存率低于20%[4-5]。近年研究结果显示，长链非编码RNA 在骨肉瘤中通过参与细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和转移等生物学过程，发挥着重要的作用[6-8]。核仁小分子RNA 宿主基因3(small nucleolar RNA host gene 3，SNHG3)位于人染色体1p35.3 位置上，在多种肿瘤中异常表达。研究发现SNHG3 在骨肉瘤组织中高表达，与不良预后显著相关；SNHG3 靶向作用miRNA-151a-3p 上调AB22A 表达促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移[9]。微小RNA(microRNA，miRNA)在多种肿瘤中起到抑癌或促癌的作用，miR-514a-5p 在多种癌细胞中表达下调，但miR-514a-5p 在骨肉瘤的作用机制尚不明确。因此，本研究探讨SNHG3 通过靶向调控miR-514a-5p对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移的作用，为骨肉瘤疾病的诊断、治疗提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与主要试剂

    成骨细胞hFOB1.19 和骨肉瘤细胞SW-1353、HOS、U-2OS、Saos-2 购于中国科学院上海细胞库；胎牛血清(9735212)、DMEM 培养基(91249142)购于美国Gibco 公司；si-NC、si-SNHG3、miR-NC、miR-514a-5p、anti-miR-NC 和anti-miR-514a-5p 购于广州瑞博生物公司；引物由上海吉玛公司设计合成；LipofectamineTM2000 转染试剂盒(10652-011)、Trizol 试剂盒(10153-023)购于美国Invitrogen 公司；荧光定量试剂盒(RR246B)、反转录试剂盒(452237152)购于大连Takara 公司；CCK-8 试剂盒(32021)购于日本同仁公司；凋亡试剂盒(C0948)购于碧云天生物研究所；c-Myc 抗体(3097T)、Bax 抗体(0265T)、MMP-2 抗体(4026T)购于美国CST 公司；Transwell 小室(3564314 13324)购于美国Corning 公司；Matrigel 基质胶(3124523)购于美国BD 公司；双荧光素酶试剂盒(D0132)购于北京索莱宝公司 ......