潘一鸣 李蕊白 黄子明 刘 宇 费明明 陈凌燕 侯 丽

    1.北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科，北京 100700；2.温州医科大学检验医学院生命科学学院，浙江温州 325035

    急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL)患者超过90%表现为t(15；17)(q22；q12)，产生PML-RARα 融合基因，导致APL 发生[1]。维甲酸和三氧化二砷靶向PML-RARα 使APL 变得可治愈[2]。但10%的APL 患者在治疗后无法获得长期生存，耐药复发是主要原因[3]。耐砷APL 患者PML-RARα 存在错义突变，如A216T 等导致蛋白结构改变引起耐药[4-7]。为研究这一问题，本研究构建了A216T 突变的PML-RARα 质粒(以下简称PMLA216T-RARα，野生型简称为PMLWT-RARα)，并研究了砷剂雄黄对其的影响和相关机制。

    1 材料及方法

    1.1 主要材料及试剂

    砷剂雄黄(纯度≥99%，湖北信康医药化工有限公司，12279-90-2)。引物委托北京擎科生物科技有限公司合成；pCDH-puro 质粒由温州医科大学检验医学院生命科学学院实验室保存；Trizol Reagent(Life Technology，B610409-0100)；2×Phanta Max Master Mix(Vazyme，P525-01)；Plasmid Mini Kit(OMEGA，D6943-01)；Gel Extraction Kit(OMEGA，NA1111-1KT)。无缝克隆试剂盒[和元生物技术(上海)股份有限公司，M2026]；Lipo fectamineTM3000(Thermo Fisher，L3000015)；PML 抗体(ab96051)、P62 抗体(ab56416)、LC3B 抗体(ab192890)、p-mTOR 抗体(ab109268)、β-actin(ab8226)均购于abcam 公司 ......