庞丽君 裴明霞 刘 凯 林明华 陈德喜

    首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所，北京 100069

    聚合酶链式反应(ploymerase chain reaction，PCR)是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA 片段，可看作生物体外的特殊DNA 复制。PCR 技术是20 世纪80 年代中期发展起来的体外核酸扩增技术，具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。PCR 技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑，不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究等方面，可以从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA 供分析研究和检测鉴定[1-2]。PCR 技术是分子生物学的基本技术之一，也是科研工作中很常用的技术，因此，熟练掌握PCR 技术对研究生以后的科研学习以及临床工作都有至关重要的意义。

    1 实验原理

    PCR 技术是以拟扩增的DNA 分子为模板，以一对与模板互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA 聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿DNA 模板链延伸直至完成两条新链合成，重复这一过程，即可使目的DNA 片段得到扩增。PCR 技术中反应步骤包括预变性、变性、退火、延伸、再延伸几个部分。首先，模板DNA 发生变性，即高温下模板DNA 双链解离，使之成为单链，以便与引物结合，为后续反应做准备；其次，模板DNA 与引物的退火，是指模板DNA 经过加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板单链DNA 上特定部位配对结合的过程；最后，进行引物延伸，DNA 模板-引物结合物在DNA 聚合酶的作用下，以靶序列为模板，四种脱氧核苷酸按碱基互补配对原则连接在引物之后，使其延伸合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链[3-4]。

    2 教学目标

    基于课程内容要求、具体专业特点，并围绕培养学生科研素养的要求 ......