高晓斌 武雪亮 赵轶峰 聂双发 梁 峰 张迎春

    河北北方学院附属第一医院普通外科，河北张家口 075000

    结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度侵袭性，治疗选择有限且5 年生存率较低，因此迫切需要寻找有效的分子生物标志物，这些生物标志物可以促进早期检测或肿瘤对特定疗法的反应，以降低死亡率。Piwi 相互作用RNA(Piwi-interacting RNA，piRNA)是一种新型的RNA 干扰家族，已被证明是癌症早期检测和治疗的有效生物标志物[1-4]。与微RNA 和小干扰RNA 不同，piRNA 的特征是具有21～35 个核苷酸的单链小非编码RNA 沉默子，带有2’-O-甲基修饰的3’末端并与Piwi 蛋白结合形成功能性沉默复合物[5-6]。piRNA 的失调发生在多种癌症中，例如多发性骨髓瘤、乳腺癌、食管癌[7]。基于piRNA 在癌症样本中的表达差异可以将癌症患者与健康人群区分开，其检测灵敏度高于癌胚抗原和糖类抗原19-9[8-9]。此外，手术前后患者piRNA 的表达变化可用于术后长期监测和疾病进展指标[10]。而本研究则旨在探究piR-128 在结直肠癌中发挥的生物学作用及其对DNA 甲基化酶(DNA methylase，DNMT)3B 的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 患者和标本的获取

    选取2018 年2 月至2020 年1 月于河北北方学院附属第一医院(以下简称“我院”)普通外科诊断为结直肠癌的54 例患者的手术标本，包括其结直肠癌组织和匹配的正常组织(距肿瘤边缘3～7 cm)，且经我院病理科病理诊断。参照美国癌症联合委员会对研究对象进行TNM 分期[7]，根据《中国结直肠癌诊疗规范》[10]评估其组织学等级。纳入标准：①在我院普通外科行手术治疗；②年龄≥18 岁；③首次诊断。排除标准：①合并其他系统肿瘤；②采用化学疗法或放射疗法；③孕妇。本研究获得我院伦理审查委员会批准(伦审：K20150212)。

    1.2 RNA 提取、逆转录和qRT-PCR

    使用Trizol(Invitrogen，Thermo Fisher Scientific，美国)从人类组织或细胞中提取总RNA，通过Nanodrop 2 000(Invitrogen，美国)定量总RNA ......