王继升 鲍丙豪 邓 省 冯隽龙 李海松

    北京中医药大学东直门医院男科，北京 100700

    [关键字]菟丝子；枸杞子；男性不育症；增殖；凋亡

    男性不育症是指夫妇有规律性生活1 年以上，未采用避孕措施，由于男方因素造成女方无法自然受孕[1]。研究表明，有10%～15%的夫妇面临不孕不育的困扰[2]。中医学认为，肾精亏虚是导致男性生精功能障碍的重要病因[3-4]，而菟丝子-枸杞子药对是临床中常用的补肾填精药物组合，在临床上被广泛用于少弱精子症的治疗[5-6]。

    精原细胞是精子生成的基础，本课题组既往研究表明，菟丝子-枸杞子可对精原细胞有修复作用[7-9]。本研究拟观察菟丝子-枸杞子对精原细胞的增殖、周期及超微结构的治疗作用，为补肾填精法治疗男性不育症提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及细胞

    动物：北京维通利华有限公司提供6 周龄SPF 级雄性SD 大鼠20 只，体重(200±20)g，主要用于含药血清制备，动物许可证号：SCXK(京)2016-0006，动物合格证号：1100111911000582。实验实施、动物喂养均在北京中医药大学东直门医院(以下简称“我院”)重点实验室动物中心进行，饲养条件依照实验室动物标准条件。

    细胞：精原细胞购自武汉普诺赛公司(货号：CL-0600)，当细胞覆盖率达70%～80%时，按1∶5 比例传代培养，48 h 更换完全培养基。本研究通过我院动物伦理委员会审查(NO：19-27)。

    1.2 主要试剂与仪器

    雷公藤多苷(批号：130801，每片10 mg)，左卡尼汀口服液(批号：130801)，菟丝子-枸杞子免煎颗粒剂各15 g，均购自北京康仁堂股份有限公司。细胞凋亡(T2190)、细胞周期(CA1510)、线粒体膜电位(M8650)试剂盒均购自Solarbio 公司。

    透射电子显微镜[日本Hitachi HT7700(80KV)]、全自动脱水机(沈阳誉德有限公司SYD-T2070)、石蜡包埋机(沈阳誉德有限公司SYD-B-F)、石蜡切片机(沈阳誉德有限公司SYD-S3020)、离心机(德国Eppendorf 公司Centrifuge 5415D)、超净工作台(中国东联FLC-3 型) ......