徐朝军 张胜康 张 怡 周代勇 宋 岚

    1.湖南中医药大学第一附属医院心胸外科，湖南长沙 410007；2.湖南中医药大学生物化学与分子生物学教研室，湖南长沙 410208

    随着体外循环方法和外科技术的提高，体外循环心脏手术的安全性大大提高，然而肺部并发症是心脏术后重要的死亡原因，而大多数肺部并发症与体外循环术后急性肺损伤有关[1-2]，微RNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA 分子，它们在转录后水平沉默特定基因，对生物体基因表达发挥精细调节的作用。研究发现microRNA 可能在体外循环急性肺损伤中也发挥重要作用[3-4]。

    血必净注射液临床广泛用于脓毒症及急性肺损伤[5-6]。本课题组前期研究发现，血必净可以有效改善体外循环术后患者的肺功能，但是其具体机制目前尚未明确[7-9]。近年来研究表明，中药及其活性成分对miRNA 能起到广泛调节作用[10-11]，本研究运用生物信息学技术获取与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡相关性的候选miRNAs，再建立SD 大鼠体外循环肺损伤模型，通过real-time PCR 的方法观察血必净对体外循环急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞中候选miRNA 表达的影响，从分子水平探讨血必净注射液治疗体外循环急性肺损的机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 30 只清洁级雄性SD 大鼠购于湖南中医药大学动物中心，动物使用许可证号：SYXK(湘)2013-0005(动物合格证号：43004700020981)，20～22 周龄，体重450～500 g。所有动物实验均获得湖南中医药大学实验动物伦理委员会许可并按照国际实验动物护理和使用指南进行(ZYFY20171017)。

    1.1.2 实验药品 血必净注射液(天津红日药业股份有限公司，批号：Z20040033)；戊巴比妥钠(sigma 公司)。

    1.1.3 实验试剂 DMEM 培养基、Trizol、cDNA 第一链合成试剂盒(货号：11752250，Invitrogen 公司)；无支原体小牛血清(杭州四季青生物工程公司)；10%水合氯(青岛育龙化学试剂有限公司)；弹性蛋白酶(Becton-Dickinson 公司)；胰脱氧核糖核酸酶(Sigma 公司)；鼠IgG(Becton-Dickinson 公司)；TaqManTMmicroRNA 分析试剂盒(货号：4366596，Biosystems 公司)；PCR 引物由上海英骏公司合成；miRcute miRNA 提取分离试剂盒(货号：CW0627 ......