结核分枝杆菌6 kD 早期分泌靶抗原单克隆抗体的制备及其特异性分析
亚类,亲和力,1材料与方法,1菌株与实验动物,2主要仪器与试剂,3重组ESAT-6蛋白纯化,4ESAT-6mAb制备及纯化,5检测ESAT-6mAb亚类及相对亲和力,6检测ESAT-6mAb特
宁唤唤 任瑞 康健 白鹭 路延之 谢燕玲 张芳琳 柏银兰1.空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,陕西西安 710032;2.延安大学生命科学学院,陕西延安 716000
结核病(tuberculosis,TB)是一种严重的传染病,其病原体是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)[1]。结核菌素皮肤试验是临床诊断Mtb 感染的主要方法[2],该方法采用结核菌素纯蛋白衍生物为刺激抗原,其不能区分卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)接种、非结核分枝杆菌和Mtb 感染[3]。因此,开发快速、特异且敏感的诊断方法对于控制TB 流行十分重要。
BCG 是牛分枝杆菌经传代获得的减毒株,在传代中缺失了16 个基因差异区(region of difference,RD)[4]。RD1 区是BCG 减毒过程中最早丢失的。6 kD 早期分泌靶抗原(6 kD early secretory antigenic target,ESAT-6)由Rv3875(esxA)基因编码,该基因位于Mtb RD1 区,在BCG 及绝大多数非结核分枝杆菌中不存在[5]。培养滤液蛋白10(culture filtrate protein,CFP-10)是由RD1区Rv3874 基因编码的分泌抗原,通常与ESAT-6 形成异源二聚体[6]。γ-干扰素释放试验(interferon-gamma release assay,IGRA)是体外诊断TB 的免疫学方法,该方法是基于Mtb 感染致敏的ESAT-6 和CFP-10 特异性T 细胞,IGRA 诊断活动性TB 的敏感性和特异性高于结核菌素皮肤试验[7] ......
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