许 杰 王 晖 温 洪 张 舰

    首都医科大学附属北京朝阳医院麻醉科，北京 100020

    脑卒中是最常见的临床脑血管疾病之一[1]。缺血性脑卒中可导致脑损伤和神经功能障碍[2]。脑缺血/再灌注虽可挽救死亡细胞，但也可能加重细胞损伤[3]。因此，有必要探究影响脑卒中进程的病理机制，寻找缓解脑缺血/再灌注损伤的有效策略。目前，缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)诱导的大鼠PC12 细胞已经被广泛用于模拟脑卒中体外模型[4]，这为开展脑卒中的相关研究提供了方便。异丙酚是一种高脂溶性麻醉药物[5]，被发现可缓解缺血/再灌注诱导的脑损伤[6]。此外，异丙酚被证实可改善神经炎症损伤，并可能作为脑卒中神经保护的有效策略[7-8]。因此，揭示异丙酚调控脑卒中进程的分子机制至关重要。微RNA(microRNA，miRNA)是脑卒中进程的关键调控子。研究显示，miR-1246 在缺血性脑卒中患者血清中高表达[9]。然而，异丙酚是否通过影响miR-1246 表达调控脑卒中进程尚不清楚。因此，本实验研究异丙酚是否通过调控miR-1246 表达影响H/R 诱导的PC12 细胞损伤，为脑卒中的治疗提供潜在分子靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    PC12 细胞(货号：CL-0412)购自中国武汉procell；异丙酚(货号：2078-54-8)购自Sigma-Aldrich；DMEM 培养基(货号：11965092)、胎牛血清(货号：10100147)购自Gibco；Lipofectamine3000(货号：L300-0075)、Trizol 试剂(货号：15596026)购自Invitrogen；逆转录(货号：RR047A)和荧光定量试剂盒(货号：DRR041A)购自TaKaRa；RIPA 裂解液(货号：P0013B)、BCA 试剂盒(货号：P0012S)、MTT试剂盒(货号：C0009S)、Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒(货号：C1062S)购自上海碧云天生物技术有限公司；酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA)试剂盒(货号：ml002813、ml028514、ml002859、ml028510)购自上海酶联生物科技有限公司；miR-1246 模拟物及抑制剂(miR-1246 和anti-miR-1246)购自上海吉玛制药技术有限公司；B 淋巴细胞瘤-2(B lymphocyte-2 ......