李彬琦 李文明

    1.河北省邯郸市中心医院综合科，河北邯郸 056001；2.河北省邯郸市中心医院院前急救，河北邯郸 056001

    膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，具有易复发、易转移的特点[1-2]。膀胱癌患者早期仅出现无痛性血尿，往往不够重视，延误病情，导致晚期膀胱癌患者治疗效果不够理想，严重影响患者生活质量[3-5]。因此，深入研究膀胱癌发生发展的具体分子机制对进一步提高膀胱癌的早期诊断和治疗具有重要的意义[6-8]。层粘连蛋白γ1(recombinant laminin gamma 1，LAMC1)作为细胞外基质的重要调节因子，在细胞的增殖、分化和黏附中发挥着重要的作用[9]。LAMC1 在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭及转移等恶性生物学行为发挥重要作用[10-12]。但LAMC1 对膀胱癌细胞增殖、细胞周期的影响及其相关机制尚不清楚。本研究以膀胱癌细胞5637 作为研究对象，检测干扰LAMC1 基因表达后对膀胱癌细胞增殖和细胞周期的影响并探讨其潜在的相关机制，旨在探讨LAMC1 与膀胱癌细胞生物学特性的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    本研究从河北省邯郸市中心医院采集了2019 年1 月至2021 年12 月的行根治膀胱全切术并经病理确诊的48 例膀胱癌患者的癌及癌旁组织，癌旁组织选择距癌灶边缘5 cm 以上并病理诊断为正常组织。其中包括男32 例，女16 例；<60 岁14 例，≥60 岁34 例；平均年龄(66.3±14.2)岁；T2期26 例，T3～4期22 例。本研究经河北省邯郸市中心医院伦理委员会批准通过(20190124)，并在采集标本前均获得患者知情同意并签署了知情同意书。

    1.2 纳入及排除标准

    纳入标准：①原发性肿瘤，且术后病理组织活检证实为膀胱癌；②有完整的临床、病理及预后随访资料。排除标准：①妊娠期及哺乳期的妇女；②合并其他恶性肿瘤；③肝、肾功能障碍；④合并自身免疫性疾病、血液系统疾病及其他器官或系统恶性肿瘤；⑤术前行放、化疗及免疫治疗。

    1.3 材料

    人膀胱癌UMUC3、T24、5637 及J82 细胞购于中国科学院上海生科院细胞库；RPMI-1640(SH30809。01)培养基和胎牛血清(货号：SV30087.03)购于美国Hyclone 公司；LipofectamineTM2000、青霉素/链霉素双抗、SuperScript ⅣFirst-Strand Synthesis System 试剂盒购于美国赛默飞公司；RNA 提取试剂盒(货号：DP424)购于北京天根生化科技有限公司；二甲基亚砜细胞冻存液(货号：ST1276)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)(货号：C0221B)、0.25%胰蛋白酶(货号：C0209)、电转缓冲液(货号：P0021A)、电泳缓冲液(货号：ST466)、吐温20(货号：ST2789)、蛋白质裂解缓冲液(货号：P0013B)、PVDF 膜即聚偏二氟乙烯膜(货号：FFP19 和FFP24)、BCA 蛋白检测试剂盒(货号：P0010S)、电化学发光ECL 试剂盒(货号：P0018S)及Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒(货号：C0038)购于碧云天生物有限公司；细胞周期试剂盒(货号：KGA511)凯基生物有限公司；SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒(30～50 gels)(货号：AR0138)购于武汉博士德生物工程有限公司 ......