韩世诚 王婷婷 张一昕 王 茜 柴天川

    1.河北中医药大学药学院，河北石家庄 050091；2.河北省中医院制剂科，河北石家庄 050091

    药物性肝损伤(drug induced liver injury，DILI)是由药物引起的常见不良反应之一，据报道，对乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP)是引起肝衰竭的主要因素之一[1]。长期大量使用APAP，过量产物N-乙酰苯醌亚胺攻击线粒体，破坏其结构，增加通透性，降低膜电位；损伤活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的防御体系，增加线粒体ROS 生成，激活线粒体内c-jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase，JNK)，促进线粒体不断产生ROS，导致线粒体膜脂质过氧化[2-5]。ROS的过量产生又可引起内质网应激，从而激活增强子CCAAT 结合蛋白同源蛋白(CHOP)转录，促进细胞凋亡，进一步诱发肝损伤。楮实子味甘，气寒，无毒，入肾、肝二经。具有滋肾益阴、清肝明目等功效。前期研究证实，楮实子能够改善APAP 所致肝损伤大鼠的氧化应激及炎症反应，并对线粒体形态损伤有一定的修复作用[6-7]。为了进一步探究其基于线粒体损伤的护肝作用机制，本研究采用APAP 损伤人正常胚胎肝细胞株L02 后，用楮实子水提物加以干预，通过检测细胞存活率及细胞内ROS 水平、线粒体膜电位水平、JNK、GRP78、CHOP 蛋白表达水平，在体外分子水平验证楮实子护肝作用机制。

    1 对象与方法

    1.1 实验细胞

    人正常肝细胞L02 细胞，河北医科大学惠赠。

    1.2 主要药品与试剂

    楮实子提取物(1 g 水提物=10 g 饮片)，西安汇林生物科技有限公司提供，批号：HL- 210120；楮实子粉碎后、加热煎煮，过滤得到药液，通过喷雾干燥设备雾化后在热风作用下快速蒸发和凝固，得到楮实子提取物，密封容器保存，按照需要的浓度稀释于RPMI-1640 基础培养基中。JNK 抗体、GRP78 抗体、p-JNK抗体(批号：GB12002、GB11098、GB13019-1)；CHOP 抗体(批号：15204-1-AP) ......