消退素D1 对结肠癌细胞K-Ras/ Notch 信号通路串话的影响
孵育,1材料与方法,1主要材料与仪器,2细胞培养和分组,3CCK-8细胞活性实验,4克隆形成实验,5Westernblot检测,6免疫荧光检测,7Transwall实验,8统计学方法,2结果
杜 恒 吴安定 余 洁 王 飞 周 勇湖北省黄冈市中心医院胃肠外科,湖北黄冈 438000
结肠癌发病机制与多种因素有关,如肿瘤炎症微环境、基因突变等,引发多种信号通路的变化[1]。实际上,信号转导过程并非均是线性传导,信号通路间存在串话现象[2]。研究显示,IL-6 可激活STAT3、Ras 和Notch 等多种信号通路,引发串话现象,进而介导肿瘤发生、发展和侵袭、转移[3]。消退素D1(resolvin D1,RvD1)是一种新型抗炎消退脂质介质,在许多炎症相关疾病模型中可抑制白细胞介素(interleukin,IL)-6分泌[4-5]。有研究显示,RvD1 可减轻炎症微环境抑制肺癌细胞侵袭、转移,但RvD1 对结肠癌细胞的影响尚不明确[5]。本实验基于IL-6 介导的信号途径,探讨RvD1 通过炎症微环境介导Ras 串话Notch 信号通路的影响,及对下游转录因子和上皮细胞-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用,为RvD1 在结肠癌的临床治疗实践中提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要材料与仪器
结肠癌细胞株SW620(ATCC 公司,HTX1675),Rv D1(Cayman 公司,10012554),K-Ras 质粒(基因生物,G12D);LipofectamineTM3000(ThermoFisher,L3000008)、IL-6 抗体(上海雅吉公司,0782R)。以下购于Absin公司:K-Ras、NICD、p-p65、p65、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、GAPDH、ELISA 试剂盒(abs115469、abs131403、abs130624、abs131170、abs130068、abs155766、abs171412、abs830030、abs510003);Cy3 标记山羊抗兔(Abcam 公司,ab6939);CCK-8 试剂(上海碧云天生物技术股份有限公司,C0037);吉姆萨染液(上海碧云天生物技术股份有限公司,C0133);BCA 蛋白质浓度测定试剂盒(Biosharp 公司 ......
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