赵宇辉 毕宏生 孙华跃 李文慧 田庆梅 卢秀珍

    1.山东中医药大学眼科与视光医学院，山东济南 250014；2.山东中医药大学附属眼科医院 山东省眼病防治研究院山东省中西医结合眼病防治重点实验室，山东济南 250002；3.山东中医药大学第一临床医学院，山东济南 250014

    免疫荧光(immunofluorescence，IF)技术亦称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种技术；它基于抗原、抗体相互反应的原理，将已知的抗原或抗体用荧光基团(荧光素)标记，再将这种已标记的抗原或抗体与细胞或组织内目标抗原或抗体结合，形成荧光复合体被特定波长的光激发，从而被荧光显微镜捕捉[1-3]。IF 已被广泛应用于细菌病毒和寄生虫的鉴别诊断、部分疾病免疫学机制的研究、器官移植的鉴定、抗原组织定位等方面。近视是屈光不正中最常见的一种疾病，是导致低视力的主要原因，严重损害人们的视觉质量。近年来，IF 在近视研究领域中发挥了巨大的作用。本文就近年来IF 在近视相关的生物标志物检测中的应用进行综述，以供研究参考。

    1 IF 概述

    1.1 IF 的组成和基本原理

    IF 主要由直接IF、间接IF、多重IF 和补体参与的IF 等组成。直接IF 是指特异性抗体标记荧光素后直接与目标抗原结合，形成抗原-抗体复合物而被鉴定的方法[1]。但该方法抗体均需荧光素标记，其敏感性较低，应用相对有限。间接IF 是指特异性抗体与目标抗原(一抗)结合后，再加入荧光素标记的二抗，结合形成免疫复合物而被鉴定的方法。间接IF 因其有较好的敏感性和特异性，在临床和实验研究中应用广泛[4]。多重IF 则需进行多重荧光染色，此法可同时检测多种生物标志物[5]。补体参与的IF 是指利用补体反应，形成了抗原-抗体-补体荧光复合物，荧光显微镜下所见到的发出荧光的部分即是抗原所在的部位。

    1.2 IF 的发展历程

    IF 的雏形，最早可追溯到1897 年，俄国科学家Metchnikoff 用毒素作为示踪剂，研究破伤风毒素在鸡组织中的定位[6]。人们开始尝试追踪可溶性抗原和抗体在动物体内的分布。1941 年Coons 等[7]首次在肺组织中使用荧光素标记了抗肺炎球菌抗体，这代表着IF的诞生。20 世纪60—90 年代，IF 被风湿科、眼科、骨科等学科引入并广泛应用。近年来，随着其他领域科技的快速发展，IF 与探针化学、电子计算机和激光共聚焦显微镜等结合，使IF 更加灵敏；时间分辨荧光免疫分析法和荧光偏振免疫分析法等IF 分析方法的出现 ......