安 娜 李 艳 廖柳凤 梁宁生

    广西医科大学附属肿瘤医院临床药学科，广西南宁 530021

    目前，多重耐药菌已经广泛分布全世界各地，研究表明，我国革兰氏阴性杆菌的耐药高于革兰氏阳性球菌及真菌，甚至有些对碳青霉烯类抗菌药物出现了耐药[1-5]。抗菌肽是广泛存在于生物体内的天然多肽，其具有广谱抗菌等特点[6-8]。人们相继从高等动植物中分离获得抗菌肽，并发现抗菌肽对部分细菌、真菌、病毒及癌细胞等均具有强有力的杀伤作用[9-10]。大量的文献报道这些分子是高度特异性的抗微生物化合物，极具成为新型抗菌药物的潜力[11-15]。因此，对抗菌肽的杀菌活性研究逐渐成为热点。磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)是一类能够参与水解磷脂sn-2 键的酶，具有抗菌、抗感染、抗肿瘤等多种生物活性[16-17]。近年来，越来越多的研究表明，PLA2氨基末端衍生肽在抗细菌感染方面具有重要作用[18-20]。为了进一步探讨其抗细菌活性的机制，本文研究了PLA2氨基末端衍生肽的合成及其抗细菌活性。

    1 材料与方法

    1.1 PLA2 氨基端肽PLA2N11、PLA2N15、PLA2N20 的合成

    ①材料准备：细胞培养液(批号：2010060303)、血清(批号：19110502)、胰蛋白酶(批号：2009240202)、胶原蛋白酶(批号：9001121)等，上述试剂均由浙江森瑞生物科技有限公司提供。②细胞培养：将细胞培养在适当的条件下，待细胞生长到所需密度后，加入胰蛋白酶和胶原蛋白酶进行消化。③提取PLA2：将消化后的细胞离心，取上清液，加适量硫酸铵溶液沉淀。沉淀物即为PLA2。④氨基端肽的制备：将PLA2溶解在缓冲液中，加入胰蛋白酶水解，得到氨基端肽。⑤纯化氨基端肽：将水解产物进行离子交换和凝胶过滤色谱，得到纯化的氨基端肽。在Fmoc 固相合成法中α-氨基用Fmoc 保护基(图1)进行保护 ......