蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对TGF-β1表达的影响(1)
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【摘要】 目的 研究蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的疗效及细胞凋亡的作用和机理。方法 建立裸鼠人胰腺癌模型，随机分为对照组(NS)、5-氟尿嘧啶组(5-Fu)、蟾毒灵低剂量组(Bu L)、蟾毒灵高剂量组(Bu H)。分别腹腔注射生理盐水 NS，20 ml/kg、5-Fu 24 mg/kg、Bu 1 mg/kg、Bu 1.5 mg/kg。用药后第7天处死，计算肿瘤生长抑制率；TUNEL 法检测瘤体凋亡指数；免疫组化S-P法检测P38、TGF-β1的表达。结果 治疗后与NS组相比，各组瘤体体积均显著缩小(P[1，2]。但其治疗胰腺癌尚未见报道，本文观察蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的治疗作用，并从蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对TGF-β1信号转导的影响探讨其治疗胰
腺癌的机制。
1 材料和方法
1.1 实验动物
BALB/C,裸鼠80只，4～5周龄，雌
雄各半，于SPF级动物实验室内的超净生物层流架中恒温无菌饲养。
1.2 主要药物
5-氟尿嘧啶5-Fu注射液(批号：050908，上海旭东海普药业有限公司，10 ml∶0.25 g)、蟾毒灵购自美国Sigma公司，剂型为粉针剂，10 mg/支。
1.3 主要仪器和试剂
CO2恒温培养箱，德国Heraeus Instruments公司；超净工作台，苏州净化仪器厂；倒置显微镜，日本Olympus公司；DMEM细胞培养基干粉，美国GIBCO公司；新生牛血清，500 ml，美国GIBCO公司；胰蛋白酶，美国Sigma公司。
1.4 细胞株来源与培养
人胰腺细胞株SW1 900，由上海中医药大学分子与细胞培养室提供，常规复苏传代培养。在37 ℃, 5% CO2:饱和湿度条件下，培养于含10%灭活的小牛血清、RPMI 1 640培养液中。体外培养至对数生长期时，离心、磷酸盐缓冲液洗涤，配制成1×107个/ml。
1.5 荷瘤小鼠模型的建立 ①细胞接种：取4～6周龄BALB/C 裸鼠5只，体质量(20±2)g，雌雄各半。常规接种裸鼠背部近右上肢皮肤，注入0.2 ml制备好的单细胞悬液，细胞数约为2×106。隔离鼠笼内SPF条件下，恒温恒湿饲养;②组织块接种：经过5～7 d的潜伏期，裸鼠皮下肿瘤生长至1～1.2 cm，将供瘤鼠脱颈椎处死。沿移植瘤包膜小心剥离皮下肿瘤组织。取肿瘤边缘的新鲜肿瘤组织，眼科剪剪成直径1 mm×1 mm×1 mm大小组织块，置于生理盐水中备用。在超净台用20 g套管针接种于裸小鼠背部皮下。受体裸小鼠继续饲养于层流柜中。待皮下肿瘤直径约0.5 cm，即可作为模型用。
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