维生素E和维生素C联合应用对慢性镉中毒小鼠黑质神经元的保护作用(1)
【摘要】 目的 探讨维生素E(Vit E)和维生素C(Vit C)联合用药对慢性镉中毒小鼠黑质神经元的保护作用。方法 小鼠染镉同时给予大量Vit E和Vit C，通过光镜观察小鼠黑质神经元的细微结构，并用细胞形态计量方法对黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性反应神经元进行定量分析。结果 Vit E和Vit C加镉组小鼠中脑黑质区结构接近正常对照组，与镉中毒组比较有明显不同，黑质神经元胞核体密度、数密度等形态学参数与镉中毒组比较差异有统计学意义。结论 抗氧化剂Vit E和Vit C对慢性镉中毒组小鼠黑质神经元有显著的保护作用。
【关键词】 镉；维生素E；维生素C；黑质；细微结构；小鼠
Protective effects of co-administration of Vitamin E and Vitamin C on the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning miceYU Yan*，GE Guo，XU Ting-liang,et al.Department of Anatomy，Guiyang Medical College,Guiyang 550004，China
, http://www.100md.com
【Abstract】 Objective To study the protective effects of co-administration of Vitamin E and Vitamin C on the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning mice.Methods Mice were givenCdCl2 subcutaneously and simultaneously were administered Vitamin E perorally everyday,Vitamin C perorally everyday.It has been observed that the microstructure of the substantia nigra under light microscopy，the TH-positive reaction neurons in the substantia nigra were quantitatively analyzed with cell morphometric technique.Results The co-administration of Vitamin E and Vitamin C with cadmium group was similar to the contral group，but it had much apparent changes as compared with the Cd-exposed group, and the important morphological parameters such as the volume density，the numerical density of the nudei had statistical significant compared with the Cd-exposed group(P<0.001).Conclusion The antioxidants of Vitamin E and Vitamin C could efficiently protect the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning mice from such damage.
, 百拇医药
【Key words】 Cadmium；Vitamin E； Vitamin C； Substantia nigra； Microstructure； Mouse
镉(cadmium，Cd)是一种有毒重金属，镉污染对人体和环境的影响已日益受到重视。近年来发现镉对神经系统也有明显的毒性作用[1-2]，即使含量低时也有不同程度的损害[3]。我们的前期工作也表明，慢性镉中毒可致小鼠中脑黑质受损，并提示镉可能是诱发帕金森病的病因之一[4]。Vit E和Vit C是有效的抗氧化剂，国内外许多资料已表明Vit E和Vit C可保护神经组织免受Cd引起的自由基增多和氧化反应异常所造成的损害[5-7]，但是有关形态学方面的研究甚少。本研究通过对正常组、Cd中毒组、Vit E+Vit C组小鼠中脑黑质神经元进行光镜及细胞形态计量分析，探讨Vit E和Vit C联合用药对慢性镉中毒小鼠黑质神经元的保护作用。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 实验动物分组 3月龄雄性昆明种小鼠100只，体质量25～35 g，随机分为3组，每组25只。每周称小鼠体质量，观察一般情况。①正常对照组：经皮下注射等量生理盐水；②镉中毒组：双蒸水配制的氯化镉溶液按2 mg / kg·次(给药体积为5 ml/kg计算)，经皮下注射，每周2次；③ Vit E+Vit C组：除按上述方法和剂量染镉外，Vit E按10 mg/kg(d·次)，Vit C按25 mg/kg 经“金龙鱼”油稀释后灌胃，共12周。
1.2 取材与制片 12周后，各组小鼠用Bouin液通过心脏灌注固定，开颅取脑。取整个中脑用Bouin液进一步固定，石蜡包埋、切片、染色(包括H·E、尼氏法、TH免疫组化ABC法)并观察。TH免疫组化ABC法染色步骤：切片经①3% 过氧化氢10 min；②抗原修复液10 min；③正常血清封闭液20 min；④TH抗原(1∶1 600)37℃孵育1h；⑤生物素化二抗37℃孵育1 h；⑥SABC 37℃孵育1 h；⑦DAB显色。以上各步骤间均用0.01 mol/L PBS液洗3次，5 min/次。结果判定：以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性反应。
, 百拇医药
1.3 图像分析及数据处理 在TH免疫组化染色切片上，采用Biomias图像分析软件，用计算机图像分析系统，在光镜10×40倍的视野下，测量TH阳性反应神经元的二维形态参数。进一步运用体视学的方法计算出三维形态参数。文中数据采用均数±标准差(x±s)表示，两两样本对应参数平均值方差齐性用F检验，均值间比较用t检验。
2 结果
2.1 精神行为表现 正常对照组小鼠活动度大，饮食好。Cd中毒组小鼠2周后出现活动明显减少，行动迟缓，显得无精打采，饮食差；少数小鼠步态不稳，且有两只小鼠出现向一侧定向旋转的现象。Vit E+Vit C组小鼠活动未见明显减少，饮食稍差。
2.2 HE染色 正常对照组可见黑质区域细胞密集成群，神经元胞体及胞核较大，核仁清晰，胞质比较丰富。Cd中毒组黑质区神经元数量明显减少，胞体变形，少数细胞核固缩，胞质减少，胞质内可见大小不等的嗜酸性颗粒。9例小鼠黑质区域可见较大的软化灶(图1)。大部分小鼠黑质区域内尚见广泛的淋巴细胞浸润，部分淋巴细胞围绕在血管周围形成血管套有8只(图2)。Vit E+Vit C组黑质区神经元有少量减少，部分神经元变性，细胞呈圆形或卵圆形，少数细胞出现核固缩及核溶解，胞质内未见嗜酸性颗粒出现。3只小鼠黑质区有散在软化灶形成，灶内大多数神经元消失，残留神经元胞体变小，胞核固缩(图3)。黑质区可见弥漫性淋巴细胞浸润，形成血管套有2只(图4)。, 百拇医药(余 彦 戈 果 许庭良 姜俸蓉 余资江)
【关键词】 镉；维生素E；维生素C；黑质；细微结构；小鼠
Protective effects of co-administration of Vitamin E and Vitamin C on the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning miceYU Yan*，GE Guo，XU Ting-liang,et al.Department of Anatomy，Guiyang Medical College,Guiyang 550004，China
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【Abstract】 Objective To study the protective effects of co-administration of Vitamin E and Vitamin C on the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning mice.Methods Mice were givenCdCl2 subcutaneously and simultaneously were administered Vitamin E perorally everyday,Vitamin C perorally everyday.It has been observed that the microstructure of the substantia nigra under light microscopy，the TH-positive reaction neurons in the substantia nigra were quantitatively analyzed with cell morphometric technique.Results The co-administration of Vitamin E and Vitamin C with cadmium group was similar to the contral group，but it had much apparent changes as compared with the Cd-exposed group, and the important morphological parameters such as the volume density，the numerical density of the nudei had statistical significant compared with the Cd-exposed group(P<0.001).Conclusion The antioxidants of Vitamin E and Vitamin C could efficiently protect the neurons of substantia nigra in chronic cadmium poisoning mice from such damage.
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【Key words】 Cadmium；Vitamin E； Vitamin C； Substantia nigra； Microstructure； Mouse
镉(cadmium，Cd)是一种有毒重金属，镉污染对人体和环境的影响已日益受到重视。近年来发现镉对神经系统也有明显的毒性作用[1-2]，即使含量低时也有不同程度的损害[3]。我们的前期工作也表明，慢性镉中毒可致小鼠中脑黑质受损，并提示镉可能是诱发帕金森病的病因之一[4]。Vit E和Vit C是有效的抗氧化剂，国内外许多资料已表明Vit E和Vit C可保护神经组织免受Cd引起的自由基增多和氧化反应异常所造成的损害[5-7]，但是有关形态学方面的研究甚少。本研究通过对正常组、Cd中毒组、Vit E+Vit C组小鼠中脑黑质神经元进行光镜及细胞形态计量分析，探讨Vit E和Vit C联合用药对慢性镉中毒小鼠黑质神经元的保护作用。
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1 材料与方法
1.1 实验动物分组 3月龄雄性昆明种小鼠100只，体质量25～35 g，随机分为3组，每组25只。每周称小鼠体质量，观察一般情况。①正常对照组：经皮下注射等量生理盐水；②镉中毒组：双蒸水配制的氯化镉溶液按2 mg / kg·次(给药体积为5 ml/kg计算)，经皮下注射，每周2次；③ Vit E+Vit C组：除按上述方法和剂量染镉外，Vit E按10 mg/kg(d·次)，Vit C按25 mg/kg 经“金龙鱼”油稀释后灌胃，共12周。
1.2 取材与制片 12周后，各组小鼠用Bouin液通过心脏灌注固定，开颅取脑。取整个中脑用Bouin液进一步固定，石蜡包埋、切片、染色(包括H·E、尼氏法、TH免疫组化ABC法)并观察。TH免疫组化ABC法染色步骤：切片经①3% 过氧化氢10 min；②抗原修复液10 min；③正常血清封闭液20 min；④TH抗原(1∶1 600)37℃孵育1h；⑤生物素化二抗37℃孵育1 h；⑥SABC 37℃孵育1 h；⑦DAB显色。以上各步骤间均用0.01 mol/L PBS液洗3次，5 min/次。结果判定：以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性反应。
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1.3 图像分析及数据处理 在TH免疫组化染色切片上，采用Biomias图像分析软件，用计算机图像分析系统，在光镜10×40倍的视野下，测量TH阳性反应神经元的二维形态参数。进一步运用体视学的方法计算出三维形态参数。文中数据采用均数±标准差(x±s)表示，两两样本对应参数平均值方差齐性用F检验，均值间比较用t检验。
2 结果
2.1 精神行为表现 正常对照组小鼠活动度大，饮食好。Cd中毒组小鼠2周后出现活动明显减少，行动迟缓，显得无精打采，饮食差；少数小鼠步态不稳，且有两只小鼠出现向一侧定向旋转的现象。Vit E+Vit C组小鼠活动未见明显减少，饮食稍差。
2.2 HE染色 正常对照组可见黑质区域细胞密集成群，神经元胞体及胞核较大，核仁清晰，胞质比较丰富。Cd中毒组黑质区神经元数量明显减少，胞体变形，少数细胞核固缩，胞质减少，胞质内可见大小不等的嗜酸性颗粒。9例小鼠黑质区域可见较大的软化灶(图1)。大部分小鼠黑质区域内尚见广泛的淋巴细胞浸润，部分淋巴细胞围绕在血管周围形成血管套有8只(图2)。Vit E+Vit C组黑质区神经元有少量减少，部分神经元变性，细胞呈圆形或卵圆形，少数细胞出现核固缩及核溶解，胞质内未见嗜酸性颗粒出现。3只小鼠黑质区有散在软化灶形成，灶内大多数神经元消失，残留神经元胞体变小，胞核固缩(图3)。黑质区可见弥漫性淋巴细胞浸润，形成血管套有2只(图4)。, 百拇医药(余 彦 戈 果 许庭良 姜俸蓉 余资江)