应用LC-MS技术检测降糖保健品中非法添加的格列美脲
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【摘要】 目的 建立检测制剂中非法掺入的西药降糖成分的专属性方法。采用液相色谱-质谱联用法。方法 选用Venusil MP C18柱，以0.02 mol/L醋酸铵(含0.1%冰醋酸)-乙腈(45：55)为流动相，对非法制剂的提取液进行液相色谱-质谱联用分析。通过与对照品的色谱、紫外及质谱行为相比较，对非法此类药进行定量测定和定性鉴别。结果 在生命糖安胶囊中检出格列美脲，且回收率为98.51%(n=6)。结论 该方法选择性强，灵敏度高，可作为分析检测此类保健品制剂中的西药降糖成分。
【关键词】 格列美脲；液相色谱-质谱联用法
Detection of Glimepiride mixed into drug by LC-MS
JIANG Jian-guo，ZHANG Xi-ru.Institute for Drug Control of Hebei,Shijiazhuang,Hebei 050011,China
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To develop a specific method for the Glimepiride mixed into drug.The liquid chromatogra-phy-mass spectrometry method was used.Methods The Venusil MP C18 column was used with a mobile phase was 0.02 mol/L ammoniumacetate solution (with 0.1%acetic acid)-acetonitrile(45:55).The Glimepiride mixed into drug was identified according to the chromatographic behavior andmass spectral data by comparison with the reference substances. Results The Glimepiride was found in drug.Those average recovery were 98.51%(n=6).Conclusion The method is selective and sensitive and can be used to detect the Glimepiride mixed into drug.
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【Key words】 Glimepiride；The liquid chromatography-mass spectrometry method
磺酰脲类降糖药是临床上应用广泛的化学降糖类药物，由于这些药物疗效明显，一些不法分子经常在降糖类中药保健品中非法添加某种西药成分以达到其显效迅速、吸引患者的目的，患者在不知情的情况下长期服用此类药品对身体健康造成了严重危害。为了有效地打击造假者，准确、快速鉴定此类制剂中的西药成分已成为当务之急。因此有必要建立灵敏、可靠的分析方法对此类非法药物进行鉴定，本文作者建立的液相色谱-质谱联用法，对生命唐安胶囊进行了系统定性分析，发现含有格列美脲西药降糖成分， 并对其进行定量分析，取得满意的结果。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010AHT液相色谱仪；日本岛津 2010A液相色谱-质谱联用仪；格列美脲对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100374-200301)；生命唐安胶囊(抽验)；所用试剂乙腈为色谱纯，其他均为分析纯。
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2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Venusil MP C18(4.6×150 mm,5 μm)；流动相：以0.01 mol/L。
醋酸铵(含0.1%冰醋酸)-乙腈(45∶55)紫外波长274 nm；柱温为室温；理论板数按两个峰计应均不低于2 000；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。
2.2 质谱条件 色谱柱：Venusil MP C18(2.1×150 mm,5 μm)；流动相：以0.02 mol/L。
醋酸铵(含0.1%冰醋酸)-乙腈(55∶45)；流速：0.2 ml/min；进样量：5 μl；二极管阵列检测器；电喷雾化离子源；离子源喷雾电压1.5 KV；模块温度：200℃；氮气流速：1.5 L/min；检测方式：±离子一级扫描。
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2.3 对照品溶液的制备 精密称取格列美脲对照品12.01 mg，置同一50 ml的量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得储备液。精密量取储备液5 ml，置25 ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 标准曲线的制备 精密量取对照品储备液1、3、5、7、10 ml，分置25 ml的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。在上述色谱条件下分别进样10 μl，记录色谱图，以对照品浓度X(μg/ml)为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。计算回归方程为： A=1.321 3 105C+2.259 9 104,r=0.999 7。
结果表明，格列美脲分别在9.392~93.92 μg/ml范围内线性良好。
2.5 加样回收率的实验
2.5.1 供试品溶液的制备 取本品20粒，精密称定，将内容物倾出，混匀，精密称取1粒的量置25 ml量瓶中，精密量取上述对照品储备液4、5、6 ml分别加入上述量瓶中，再加流动相适量，超声溶解20 min，放至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm的滤膜滤过，即得。
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2.5.2 测定法 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，照2.1项下的方法，分别计算格列本脲和格列美脲的回收率，结果见表1。液相色谱图见图1。
2.6 含量的测定
2.6.1 供试品溶液的制备 取本品10粒，将内容物倾出，研细，精密称取2粒的量，置50 ml的量瓶中，加流动相适量，超声溶解20 min，放至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm的滤膜滤过，即得。
2.6.2 测定法 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，照2.1项下的方法，计算格列本脲和格列美脲的含量分别为1.3 mg/粒和1.0 mg/粒。
2.7 质谱检测结果 按2.2项的检测条件，取对照品溶液和供试品溶液各5 μl，注入液相-质谱联用仪中，经二极管检测器扫描得各对照品溶液和供试品溶液中相应的紫外光图谱一致。并且得到相应的一级质谱准分子离子，见图2。
结合色谱保留时间、准分子离子和紫外光谱三方面的信息，可以证实此药中含有格列本脲和格列美脲。
3 讨论
此类非法添加的保健品多为中药制剂，干扰成分很多，因此在测定时对分析方法的选择性提出了更高的要求。作者所采用的液-质联用法，通过得到的准分子离子，为更进一步的判定此类药物的性质提供了有力的依据。本方法可快速、准确的鉴定和测量此类中药保健品中掺入的格列本脲和格列美脲，对于打击非法分子提供了强有力的依据。, http://www.100md.com(姜建国 张西如)