【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定调肝灵片中大黄素、大黄酚含量的方法。方法 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温：30℃，进样量10 μl。结果 大黄素和大黄酚分别在0.005 6~0.028 μg之间和0.011 2~0.056 μg(r=0.999 8)之间成线性关系。大黄素、大黄酚总量平均回收率为100.13%(RSD＝2.53%，6例)。结论 本方法简便、准确 、重现性好。
【关键词】调肝灵片；高效液相色谱法；大黄素、大黄酚；含量测定；色谱法
Determination of emodin and chrysophanol in tiaoganling pills by HPLC
LIU Yu-bin.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Heilongjiang 150040,China
【Abstract】 Objective To establish a quality standard of Tiaoganling pills.Methods Hypersil C
18 was used with methanol-0.1%phosphoric acid as mobile phase(85:15).The flow rate was 1.0 ml/min,detective wavelength was 254 nm,column temperature was 30℃ and injection valume was 10 μl.Results Emodin and chrysophanol showed a good linear relationship in the range of 0.005 6~0.028 μg and 0.011 2~0.056 μg(r=0.999 8).The average recovery was 100.13%(RSD=2.53%,6).Conclusion The methods is simple,accurate and reproducible.
【Key words】Tiaoganling pills; HPLC; Emodin; Chrysophanol; Contant determination
调肝灵片是在原调肝灵丸的基础上进行的中药改剂剂型，有清热解毒，疏肝行滞的功能。用于肝郁气滞。建立以高效液相色谱法测定调肝灵片中大黄素、大黄酚含量的方法，对提高中药制剂质量监控，完善质量标准体系具有实际应用意义。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国Watets 6000E 高效液相色谱仪，Millennidm 32数据处理系统。
1.2 试药 对照品:大黄素、大黄酚批号：0756-200711中国药品生物制品检定所，调肝灵片(黑龙江中医药大学中医药研究院自行研制，批号080925)。甲醇(液相用)为色谱纯，所用其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
[1]色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil色谱柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)。流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15)为流动相；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃。检测波长：254 nm；进样量10 μl。
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml含大黄素2 μg、大黄酚3 μg的混合溶液，即得。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液，2、4、6、8、10 μl,分别按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得到线性方程(n=6)。大黄素Y=4 566 258.7X+450.γ＝0.999 8；大黄酚Y=8 544 660.7X-3 367.2，γ＝0.999 8。试验证明大黄素和大黄酚分别在0.005 6~0.028 μg之间和0.011 2~0.056 μg之间成线性关系。并通过原点。
2.4 稳定性试验 取同一批号调肝灵片(批号：080925)10片，除去薄膜衣，研细，取粉末0.25 g，精密称定，按“2.8”项下方法操作，再精密吸取供试品溶液10 μl，根据设定间隔时间0、1、2、3、4、5 h，按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积。结果，大黄素平均峰面积值为96 024(RSD=1.0%，6例)；大黄酚平均峰面积值为215 545(RSD＝0.9%，6例)。大黄素和大黄酚在5 h内稳定。
2.5 精密度试验 取同一批号调肝灵片(批号：080925)10片，除去薄膜衣，研细，取粉末0.25 g，精密称定，按“2.8”项下方法操作，再精密吸取供试品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，每次10 μl，测定峰面积。结果，大黄素平均峰面积值为66 977(RSD=1.4%，例)；大黄酚平均峰面积值为233 930(RSD＝1.1%，6例)。本方法精密度良好。
2.6 重现性试验 取同一批号调肝灵片(批号：080925)10片，除去薄膜衣，研细，取粉末0.25 g，精密称定6份，按“2.8”项下方法操作，再精密吸取供试品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件连续进样，每次10 μl，测定峰面积。计算大黄素、大黄酚含量。结果，大黄素、大黄酚总含量为0.247 mg/g(RSD＝3.31%，6例)。重现性较好。
2.7 回收率试验 取同一批号调肝灵片(批号：080925)10片，除去薄膜衣，研细，取粉末0.125 g，精密称定，分别加入已配制好的混合对照品(大黄素0.123 mg/ml，大黄酚0.181 mg/ml)0.1 ml，混匀，按“2.8”项下供试品溶液的制备方法操作，精密吸取供试品溶液10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积。计算回收率。结果，大黄素、大黄酚总量平均回收率为100.13%(RSD=2.53%，6例)。
2.8 样品含量测定
[2]取重量差异项下的调肝灵片10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取粉末0.25 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇30 ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液20 ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸(10∶1)溶液15 ml，置水浴中加热水解1 h，立即冷却，转移至分液漏斗中，用氯仿强力振摇提取4次，每次15 ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解，定量转移至10 ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。结果见表1。
3 讨论
3.1 本实验通过对调肝灵片中大黄素大黄酚总量的测定，达到有效的控制制剂质量的目的。调肝灵片是在原调肝灵蜜丸的基础上进行的剂型改革，对于改革后的剂型片剂，要遵循服用剂量相等于原调肝灵蜜丸剂型的服用剂量的原则，所以在工艺上作相应的改革，因此在质量控制过程中，通过对制剂中大黄素、大黄酚总量测定结果考察，验证了改革后的提取方法行之有效。
3.2 制订适合改革后的剂型质量标准，达到控制新剂型质量的目的。本方法快速，准确，行之有效。
参考文献
[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).化学工业出版社，2005.
[2] 陈发奎，等.常用中草药有效成分含量测定.人民卫生出版社，1997：112.
(刘玉斌)
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