小儿肺炎支原体感染3种检测方法阳性率的观察
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【摘要】 目的 探讨超高倍显微镜、支原体快速培养、血清抗体测定3种方法在小儿肺炎支原体感染早期诊断的价值。方法 对200例疑似小儿肺炎支原体感染患者同时进行超高倍显微镜、支原体快速培养、血清抗体测定3种方法检测。结果 200例患儿超高倍显微镜法阳性率57.5%、支原体快速培养阳性率54.5%、血清抗体阳性率39.5%。 结论 超高倍显微镜法用于小儿肺炎支原体感染结果直观、准确、快捷，有较高的临床应用价值。
【关键词】 支原体;超高倍显微镜;抗体;培养
支原体广泛存在于自然界中，已从所有哺乳动物类和禽类动物体内分离到，它们常作为共生菌定植于口腔、呼吸道。支原体可以从它们定植的初始部位播散到身体的其他部位。肺炎支原体是引起人类原发性肺炎最常见的病原体之一，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染病理变化主要是间质性肺炎、急性细支气管炎。除呼吸道感染外，还可以引起脑炎、肾炎、心肌炎、免疫性溶血性贫血等肺外疾病[1]。近年来小儿肺炎支原体感染发病率呈上升趋势，如不能及时、准确治疗，严重影响小儿的身心健康。我院对200例疑似小儿肺炎支原体感染患者同时进行超高倍显微镜、支原体快速培养、血清抗体测定3种方法检测，探讨它们在小儿肺炎支原体感染早期诊断的价值，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 200例患者中，男122例，女78例，年龄3个月~12周岁，临床症状有咳嗽、咳痰，病程多在1周以上，使用一般抗生素治疗效果不佳。
1.2 超高倍显微镜法 仪器为清华同方THMI,UP超高倍显微镜.患者用消毒棉签采取咽后壁深部的咽腔分泌物，采取时避免触及舌、腮等部位，以防止污染。取出后将咽拭子上滴加适量生理盐水，然后在玻片上充分挤压，使分泌物充分分布于玻片上，最后压上盖玻片，置于超高倍显微镜下观察。在超高倍显微镜下可见到寄生于上皮细胞中或白细胞中的支原体呈蜂窝状排列，为细小均匀散在的黑色颗粒、活动性强。观察10个视野，至少观察到1个视野内上皮细胞有支原体包含体附着或看见不停泳动的支原体；白细胞或吞噬细胞内吞噬数量不等、不能消化、大小不一、泳动异常的支原体判为阳性。
1.3 支原体快速培养法 肺炎支原体快速培养基由上海尔健医疗用品有限公司提供。按照使用说明书操作，用无菌的咽拭子在被检者口腔咽喉部捻数次采集分泌物标本，打开培养基瓶盖，把咽拭子置于瓶内搅动数次后再把咽拭子对着瓶壁挤压，尽量挤出其中液体，取出咽拭子弃之，盖上瓶盖，置于37℃恒温培养箱中培养24 h观察结果。培养基变成清亮的淡黄色为阳性，培养基原来红色不变或者颜色不清亮的黄色判断为阴性。
1.4 肺炎支原体抗体检测 试剂由兰州雅华生物技术有限公司提供。撕开铝膜袋取出测试板平放，在检测板右侧的加样孔中加入10 μl血清，再加入100 μl稀释液后平放，等待3~5 min观察检测部视窗的结果，两根红线为阳性。
2 结果
超高倍显微镜法、支原体快速培养法、血清抗体检测法3种方法的检查阳性率见表1。经χ2检验，超高倍显微镜法和支原体快速培养法差异无统计学意义(P>0.05),超高倍显微镜法和血清抗体检测法差异有统计学意义(P<0.05)，支原体快速培养法和血清抗体检测法差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，是介于细菌和病毒之间能在无活性细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。支原体肺炎主要通过飞沫传播，潜伏期可达2到3周，对大环内酯类抗生素敏感[2]。支原体肺炎是呼吸道急性感染，尤其是下呼吸道感染的最常见的菌原之一，咳嗽、咳痰等临床表现多不典型，症状多且轻重不一，x线胸片多无特征性改变。早期查体无明显阳性体征，且常伴有肺外合并症，容易误诊，确诊主要靠实验室检查，因此对此病的及时诊断和治疗有着积极的临床意义。支原体的主要检测方法有：形态学检查、支原体培养、抗原检测、血清学方法和分子生物学方法。超高倍显微镜充分运用了现代的光、光电学和医学影像学的最新成果，在保持高分辨率的前提下，把普通光学显微镜的放大倍数提高到2万倍以上。在放大的标本镜像上面可以直接观察是否有支原体存在。此方法简单、方便、快捷，其结果不受支原体数量和体内药物浓度的影响，对于临床用药治疗和疗效观察都有很大的帮助。肺炎支原体快速鉴定培养基是一种人工合成的液体培养基，其组成材料是根据肺炎支原体繁殖所需要营养成分合理配置的一套蛋白质、磷脂、碳水化合物、胆固醇、微量元素及复合抑菌因子等混合而成的营养丰富、特异性强的专用培养基，它的原理是快速繁殖增长的肺炎支原体分解葡萄糖产酸使培养基的pH下降，产生的颜色变化来判断肺炎支原体生长，标本中的其他细菌被加入的青霉素、醋酸铊和生物抑菌剂抑制[3]。人体感染肺炎支原体以后能够产生IgM和IgG抗体，IgM抗体出现较早，一般在感染1周出现，3~4周达到高峰，以后逐渐下降。IgM抗体阳性率容易受年龄、时间和B细胞功能和敏感性等影响，这也是抗体检测法和超高倍显微镜法、支原体快速培养法有显著性差异的原因。
经统计学处理，超高倍显微镜法和支原体快速培养法差异无统计学意义(P>0.05),超高倍显微镜法和血清抗体检测法差异有统计学意义(P<0.05)，支原体快速培养法和血清抗体检测法差异有统计学意义(P<0.05)。支原体抗体检测虽然目前被临床接受和广泛采用，但是受到诸多因素的干扰，假阴性比例比较高。而且实际工作中需要抽取静脉血，特别是1岁和1岁以内的幼儿需要抽取颈静脉血而不被家长接受，给临床工作带来一定的困难。超高倍显微镜法和支原体快速培养法虽无显著性差异，但两者相比，前者检查时间短，大约20 min左右即可诊断，后者则需24 h，超高倍显微镜法检测呼吸道感染成本低，结果直观、准确，患儿和家长容易配合，更具有优越性，有较高的临床应用价值。
参 考 文 献 ......
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