不同方法检测布鲁氏菌抗体的对比评价
【摘要】 目的 研究不同方法检测布鲁氏菌抗体的效果。方法 选取C地区规模养殖户与散养农户提供的1500份牛、羊血清作为研究对象， 通过虎红平板凝集试验(RBPT)、酶联免疫吸附试验 (ELISA) 与试管凝集试验(SAT)三种检测方法检测布鲁氏菌抗体， 比较三种检测方法的检测效果。结果 在1500份牛、羊血清样品中， RBPT方法检测阳性9份， 阳性检出率为0.60%， ELISA方法检测阳性7份， 阳性检出率为0.47%， SAT方法的检测阳性8份， 阳性检出率为0.53%。SAT方法检测阳性8份， 有1份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA方法检测阳性7份， 有2份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA、SAT检测结果的符合率为87.50%， RBPT、ELISA检测结果的符合率为77.78%， RBPT、SAT检测结果的符合率为88.89%。结论 ELISA与SAT检测方法的敏感性较高， 所以在实践中应选用RBPT方法初步筛查布鲁氏菌抗体， 并利用ELISA与SAT检测方法确诊， 进而为牛羊布鲁氏菌抗体防控奠定坚实基础。
【关键词】 布鲁氏菌抗体;检测方法;对比评价
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.07.114
布鲁氏菌病是人畜共患传染疾病， 主要的诱发原因就是布鲁氏菌， 临床特点以公畜睾丸炎、母畜流产、生殖器官与胎膜发炎为主要表现[1]。此疾病的发生与传播会严重危害畜牧行业的生产与人类身体健康。在布鲁氏菌病体内与体外诊断方面， 已经研发出多种诊断方式， 而最常使用的就是RBPT、ELISA、SAT等[2]。为深入探讨不同方法检测布鲁氏菌抗体的效果， 以下采用RBPT、ELISA、SAT三种检测方法对布鲁氏菌抗体进行检测， 以期进一步推进相关工作的开展。
1 材料与方法
1. 1 材料 ①试验使用试剂。布鲁氏菌SAT抗原、RBPT抗原与阳性血清， 同时准备ELISA抗体检测试剂盒。②血清来源：2015年10月～2017年10月C地区规模养殖户与散养农户提供的牛、羊血清1500份。
1. 2 方法 对1500份牛、羊血清实施SAT与RBPT检测， 并开展ELISA检测， 根据试剂盒说明书中的具体要求实施。
1. 3 观察指标 对比分析RBPT、ELISA、SAT三种不同方法检测布鲁氏菌抗体的效果。
2 结果
2. 1 布鲁氏菌阳性检出率 在1500份牛、羊血清样品中， RBPT方法检测阳性9份， 阳性检出率为0.60%， ELISA方法检测阳性7份， 阳性检出率为0.47%， SAT方法的检测阳性8份， 阳性检出率为0.53%。
2. 2 不同检测方法符合率 在1500份牛、羊血清样品中， RBPT方法检测阳性9份。SAT方法检测阳性8份， 有1份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA方法检测阳性7份， 有2份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA、SAT检测结果的符合率为87.50%， RBPT、ELISA检测结果的符合率为77.78%， RBPT、SAT检测结果的符合率为88.89%。
3 讨论
布鲁氏菌病主要是因布鲁氏杆菌诱发， 属于人畜共患传染性疾病， 也是二类传染病[3]。在畜牧养殖中， 牛、羊都是易感染布鲁氏菌病的动物。如果牛羊群中感染并传播布鲁氏菌疾病， 将带来不可估量的经济损失， 且公共卫生问题也将逐渐突显出来[4]。为此， 牛、羊布鲁氏菌病也成为各级别兽医结构必须检验项目内容。在实际检测的过程中， 应选用诸多方法互相配合， 以保证诊断结果的有效性与准确性。现阶段， 国内布鲁氏菌病最常使用的检疫技术就是血清学的诊断， 所以有必要针对各种检测方法应用于布鲁氏菌抗体检测中的效果展开系统化研究与分析， 有效规避假阳性与假阴性结果的发生， 提高检测准确性[5]。
目前阶段， 国内大多数地区都將RBPT作为初筛的首选方法， 而SAT则发挥配套辅助作用， 对牛羊布鲁氏菌病进行监测与监控。长期以来， SAT始终都是诊断布鲁氏菌病的常规性血清学手段， 若对此方法单独使用， 很容易出现假阳性亦或是假阴性的情况， 且并非全部感染动物的抗体水平都具有诊断的意义， 误诊与漏诊的几率偏高。在以上试验研究中， 针对1500份牛、羊血清布鲁氏菌病的非免疫抗体实施必要的检测， 特别是RBPT、ELISA、SAT检测方式中， 具有较高敏感性的检测方法就是ELISA， 且SAT检测的敏感程度也超过RBPT。针对血清学试验而言， 就是针对血清亦或是乳中所含有的布鲁氏菌抗体进行有效的检测。而在布鲁氏菌病的血清学诊断中， 最常见的就是平板凝集试验， 一般将其应用在初步筛查布鲁氏菌病的普查过程中。但需要注意的是， 这种检测方法很容易发生非特异性的凝集情况， 所以尽量不在基层兽医检测工作中应用这种检测方法[6]。现阶段， RBPT已经逐渐发展成布鲁氏菌病普查的主要方式， 且实际的检出几率和平板凝集试验大致相同， 但是要比SAT阳性检出几率低。通常情况下， RBPT是不能有效替代平板凝集试验和SAT的， 而是要合理选用综合诊断的方式， 并在布鲁氏菌病的早期诊断当中加以运用。而SAT则始终被应用于布鲁氏菌病诊断中， 被当做常规性的血清学方式， 且国内家畜布鲁氏菌病的检测标准就是以SAT为基础所形成的复核诊断方式。若对SAT进行单独使用， 还会发生假阴性反应亦或是假阳性的反应[7]。除此之外， 并非全部被感染的动物抗体水平都具备诊断意义， 所以直接增加了误诊以及漏诊的几率。对于ELISA的检测方法而言， 也是近年来最常使用的血清学检测方式， 具有较高的敏感性以及特异性， 也是国际贸易领域的指定试验。在实验过程中发现， ELISA与SAT相比， 其敏感性要更高， 高出10～1000倍左右， 所以也是诊断布鲁氏菌病的重要方式。在具体操作方面， RBPT的操作相对便捷， 且使用时间不长。而SAT获取结果的时间相对较长， 且需要实验工作人员用肉眼观察并对结果进行判定， 所以主观性十分显著。另外， 对于ELISA的检测方法而言， 可以对布鲁氏菌病进行有效地监测， 实际操作也相对便捷， 具有较高的敏感性， 能够获得准确性较高的结果， 具有一定的可行性。为此， 在具体检测时有必要将RBPT、ELISA与SAT三种不同的检测方法相互结合， 以保证优劣互补， 提高检测结果的准确性。优先选择使用RBPT开展筛选工作， 针对疑似阳性的样品使用ELISA与SAT检测方法进行复检， 最终准确地确诊， 实现防控并进化布鲁氏菌病的目标。只有这样， 才能够确保准确诊断布鲁氏菌病， 及早发现并结合实际情况科学合理地采取防治措施， 以免牛羊养殖遭受严重的经济损失， 制约养殖业的进步， 不断提高牛羊生长质量， 促进牛羊养殖产业的可持续发展。
参考文献
[1] 张亮， 王基隆， 丁家波， 等. 三种血清学布鲁氏菌检测方法在不同疫苗免疫奶牛中的比较. 山东农业科学， 2017(12)：126-129.
[2] 杨威， 韩小平， 张志勇， 等. 戊二醛交联的传感器检测布鲁氏菌抗体的研究. 山西农业大学学报(自然科学版)， 2018(6)：71-76.
[3] 王芳， 蒋卉， 朱良全， 等. 检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病. 第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛)论文集， 2014：238-244.
[4] 赵咏中， 方玉鹏， 王建军， 等. 湖羊布鲁氏菌S2疫苗免疫血清抗体消长规律研究. 中国动物检疫， 2017(10)：75-78， 89.
[5] 罗成群. 不同方法检测布鲁氏菌抗体的比较分析. 中国畜牧兽医文摘， 2017(11)：57.
[6] 樊生平， 齐守军， 李连平， 等. 布鲁氏菌病疫苗S2株免疫成年绵羊的抗体消长规律试验. 中国动物检疫， 2017(2)：88-90.
[7] 杨秀芹， 宋旭婷， 徐雪， 等. 绵羊群体中不同布鲁氏菌病血清学诊断方法比较研究. 东北农业大学学报， 2016(3)：11-16.
[收稿日期：2018-09-29], 百拇医药(李玉鑫)
【关键词】 布鲁氏菌抗体;检测方法;对比评价
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.07.114
布鲁氏菌病是人畜共患传染疾病， 主要的诱发原因就是布鲁氏菌， 临床特点以公畜睾丸炎、母畜流产、生殖器官与胎膜发炎为主要表现[1]。此疾病的发生与传播会严重危害畜牧行业的生产与人类身体健康。在布鲁氏菌病体内与体外诊断方面， 已经研发出多种诊断方式， 而最常使用的就是RBPT、ELISA、SAT等[2]。为深入探讨不同方法检测布鲁氏菌抗体的效果， 以下采用RBPT、ELISA、SAT三种检测方法对布鲁氏菌抗体进行检测， 以期进一步推进相关工作的开展。
1 材料与方法
1. 1 材料 ①试验使用试剂。布鲁氏菌SAT抗原、RBPT抗原与阳性血清， 同时准备ELISA抗体检测试剂盒。②血清来源：2015年10月～2017年10月C地区规模养殖户与散养农户提供的牛、羊血清1500份。
1. 2 方法 对1500份牛、羊血清实施SAT与RBPT检测， 并开展ELISA检测， 根据试剂盒说明书中的具体要求实施。
1. 3 观察指标 对比分析RBPT、ELISA、SAT三种不同方法检测布鲁氏菌抗体的效果。
2 结果
2. 1 布鲁氏菌阳性检出率 在1500份牛、羊血清样品中， RBPT方法检测阳性9份， 阳性检出率为0.60%， ELISA方法检测阳性7份， 阳性检出率为0.47%， SAT方法的检测阳性8份， 阳性检出率为0.53%。
2. 2 不同检测方法符合率 在1500份牛、羊血清样品中， RBPT方法检测阳性9份。SAT方法检测阳性8份， 有1份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA方法检测阳性7份， 有2份是RBPT检测出的阳性血清样品。ELISA、SAT检测结果的符合率为87.50%， RBPT、ELISA检测结果的符合率为77.78%， RBPT、SAT检测结果的符合率为88.89%。
3 讨论
布鲁氏菌病主要是因布鲁氏杆菌诱发， 属于人畜共患传染性疾病， 也是二类传染病[3]。在畜牧养殖中， 牛、羊都是易感染布鲁氏菌病的动物。如果牛羊群中感染并传播布鲁氏菌疾病， 将带来不可估量的经济损失， 且公共卫生问题也将逐渐突显出来[4]。为此， 牛、羊布鲁氏菌病也成为各级别兽医结构必须检验项目内容。在实际检测的过程中， 应选用诸多方法互相配合， 以保证诊断结果的有效性与准确性。现阶段， 国内布鲁氏菌病最常使用的检疫技术就是血清学的诊断， 所以有必要针对各种检测方法应用于布鲁氏菌抗体检测中的效果展开系统化研究与分析， 有效规避假阳性与假阴性结果的发生， 提高检测准确性[5]。
目前阶段， 国内大多数地区都將RBPT作为初筛的首选方法， 而SAT则发挥配套辅助作用， 对牛羊布鲁氏菌病进行监测与监控。长期以来， SAT始终都是诊断布鲁氏菌病的常规性血清学手段， 若对此方法单独使用， 很容易出现假阳性亦或是假阴性的情况， 且并非全部感染动物的抗体水平都具有诊断的意义， 误诊与漏诊的几率偏高。在以上试验研究中， 针对1500份牛、羊血清布鲁氏菌病的非免疫抗体实施必要的检测， 特别是RBPT、ELISA、SAT检测方式中， 具有较高敏感性的检测方法就是ELISA， 且SAT检测的敏感程度也超过RBPT。针对血清学试验而言， 就是针对血清亦或是乳中所含有的布鲁氏菌抗体进行有效的检测。而在布鲁氏菌病的血清学诊断中， 最常见的就是平板凝集试验， 一般将其应用在初步筛查布鲁氏菌病的普查过程中。但需要注意的是， 这种检测方法很容易发生非特异性的凝集情况， 所以尽量不在基层兽医检测工作中应用这种检测方法[6]。现阶段， RBPT已经逐渐发展成布鲁氏菌病普查的主要方式， 且实际的检出几率和平板凝集试验大致相同， 但是要比SAT阳性检出几率低。通常情况下， RBPT是不能有效替代平板凝集试验和SAT的， 而是要合理选用综合诊断的方式， 并在布鲁氏菌病的早期诊断当中加以运用。而SAT则始终被应用于布鲁氏菌病诊断中， 被当做常规性的血清学方式， 且国内家畜布鲁氏菌病的检测标准就是以SAT为基础所形成的复核诊断方式。若对SAT进行单独使用， 还会发生假阴性反应亦或是假阳性的反应[7]。除此之外， 并非全部被感染的动物抗体水平都具备诊断意义， 所以直接增加了误诊以及漏诊的几率。对于ELISA的检测方法而言， 也是近年来最常使用的血清学检测方式， 具有较高的敏感性以及特异性， 也是国际贸易领域的指定试验。在实验过程中发现， ELISA与SAT相比， 其敏感性要更高， 高出10～1000倍左右， 所以也是诊断布鲁氏菌病的重要方式。在具体操作方面， RBPT的操作相对便捷， 且使用时间不长。而SAT获取结果的时间相对较长， 且需要实验工作人员用肉眼观察并对结果进行判定， 所以主观性十分显著。另外， 对于ELISA的检测方法而言， 可以对布鲁氏菌病进行有效地监测， 实际操作也相对便捷， 具有较高的敏感性， 能够获得准确性较高的结果， 具有一定的可行性。为此， 在具体检测时有必要将RBPT、ELISA与SAT三种不同的检测方法相互结合， 以保证优劣互补， 提高检测结果的准确性。优先选择使用RBPT开展筛选工作， 针对疑似阳性的样品使用ELISA与SAT检测方法进行复检， 最终准确地确诊， 实现防控并进化布鲁氏菌病的目标。只有这样， 才能够确保准确诊断布鲁氏菌病， 及早发现并结合实际情况科学合理地采取防治措施， 以免牛羊养殖遭受严重的经济损失， 制约养殖业的进步， 不断提高牛羊生长质量， 促进牛羊养殖产业的可持续发展。
参考文献
[1] 张亮， 王基隆， 丁家波， 等. 三种血清学布鲁氏菌检测方法在不同疫苗免疫奶牛中的比较. 山东农业科学， 2017(12)：126-129.
[2] 杨威， 韩小平， 张志勇， 等. 戊二醛交联的传感器检测布鲁氏菌抗体的研究. 山西农业大学学报(自然科学版)， 2018(6)：71-76.
[3] 王芳， 蒋卉， 朱良全， 等. 检测OMP28抗体不能有效诊断羊布鲁氏菌病. 第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛)论文集， 2014：238-244.
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[7] 杨秀芹， 宋旭婷， 徐雪， 等. 绵羊群体中不同布鲁氏菌病血清学诊断方法比较研究. 东北农业大学学报， 2016(3)：11-16.
[收稿日期：2018-09-29], 百拇医药(李玉鑫)