李泽锐 高静 刘兴旺

    2019 年12 月新型冠状病毒肺炎疫情大暴发, 虽然目前我国对新型冠状病毒疫情的防控取得了阶段性胜利, 但全球疫情仍极为严峻, 严重危害公共卫生安全和社会繁荣稳定。我国疫情防治工作的重点已转向境外输入病例的预防控制、冷链进口商品的控制和人与人之间的密切接触污染。临床医疗机构和疾病防治部门新型冠状病毒检测已成为常态, 应该大幅改进, 具备随时应对新一波疫情能力[1]。新型冠状病毒具有较强的传染性和致死性, 采取快速、准确、方便的诊断方法对其进行检测是发现传染源、阻断疾病传播链、防控疫情的关键。常见的病原体检测方法有病原体培养、血清抗体检测、核酸检测等。病原体培养法的病毒培养时间长、效率低。血清抗体检测的特异性较低。核酸检测方法具有时间短、特异性强等优势。RT-PCR技术是目前最可靠和准确的核酸检测方法, 检测结果准确率在98.7%～99.5%[2]。RT-PCR 技术通过高温变性、低温退火、引物延伸的多次循环可将靶标扩增上万甚至上亿倍, 能有效区分病毒类型和亚型。本文对RT-PCR 技术在新型冠状病毒核酸检测中的应用进行了总结和展望。

    1 实时荧光聚合酶链式反应(PCR)法检测的特点

    PCR 可用于扩增某些DNA 片段, 也被认为是体外特殊的DNA 复制。PCR 技术的基本原理类似于DNA的自然复制过程, 其特异性取决于寡核苷酸引物, 寡核苷酸引物与靶序列的两端互补[3,4]。由于逆转录过程导致额外步骤和可能造成的损坏, 除目前已经被国家药品监督管理局(NMPA)批准的荧光PCR 法, 一步法逆转录荧光PCR 法也会开发用于实验室诊断新型冠状病毒[5]。一步法荧光PCR 法的建立能够缩短检测时间成本、人力成本和误差。PCR 技术具有许多技术优势,因为存在聚合酶链式反应抑制剂, 所以它受到的影响较小, 有更高的灵敏度。PCR 产物的生成量是以指数方式增加的, 能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=10-6)水平, 能在100 万个细胞中可以检测到1 个目标细胞 ......