汪国庆 林萃 吕晓萍 谭功军 周玉球

    遗传代谢病是由于基因突变引起参与体内代谢的酶、运载蛋白、膜或受体缺陷, 导致机体代谢紊乱, 造成中间、旁路代谢产物蓄积或终末代谢产物缺乏, 引发一系列临床症状的一组疾病[1]。目前, 串联质谱已经发展成为早期发现和筛查遗传代谢病的最重要的平台之一, 越来越多的国家和地区采用串联质谱技术进行新生儿遗传代谢病筛查。本研究旨在通过串联质谱技术对珠海地区20364 例新生儿干血斑样本中11 种氨基酸和31 种肉碱含量进行检测, 并按纳入标准筛选其中18542 例新生儿筛查结果进行统计分析, 建立珠海地区正常新生儿群体串联质谱遗传代谢病筛查42 项指标的参考区间, 以期为本地区新生儿遗传代谢病筛查提供可靠依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 资料来源于2021 年1 月～2022 年12 月在珠海地区各分娩机构出生的20364 例新生儿串联质谱遗传代谢病筛查结果。纳入标准：足月、正常出生体重、出生后3～7 d 采血的健康新生儿。共筛选出18542 例新生儿, 其中男9814 例, 女8728 例。本研究通过珠海市妇幼保健院医学伦理委员会审批(2020112501), 所有筛查对象监护人均签署知情同意书。

    1.2 方法

    1.2.1 标本采集 采集出生72 h 后并充分哺乳的新生儿足跟血, 滴于S&S903 专用滤纸上制成血片, 按要求填写各项资料, 将血片悬空平置自然晾干, 装入防潮避光袋密封保存于冰箱(2～8℃), 5 个工作日内递送至珠海市妇幼保健院进行检测。

    1.2.2 仪器和试剂 美国AB SCIEX API3200MD 串联质谱仪、PerkinElmer Puncher 9 全自动打孔仪、杭州奥盛MB100-2A 恒温孵育振荡器, 试剂采用PerkinElmer公司生产的非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒, S&S903 新生儿筛查专用滤纸由杭州杰毅麦特公司生产(浙杭械备20210259)。

    1.2.3 检测方法 严格按照PerkinElmer 非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒说明书操作。用Puncher 9 打孔器取直径 3 mm 的待测样品和质控品血斑置于 96 孔萃取板中；每孔加入100 μl 含有氨基酸、肉碱内标的工作液(以氨基酸、肉碱内标原液和萃取液按1∶108 比例配制)；用粘性膜覆盖96 孔萃取板后上恒温孵育振荡器, 以45℃、650 r/min 的条件萃取45 min；取出萃取板恢复至室温后, 转移75 μl 萃取液至96 孔V 型板中, 用铝箔纸覆盖后上串联质谱仪检测 ......