针刀干预对神经根型颈椎病疼痛模型大鼠背根神经节IL—1β、TNF—α和CGRP的影响(1)
摘要：目的 研究针刀干预对神经根型颈椎病疼痛模型大鼠背根神经节IL—1β、TNF—α和CGRP的影响，探讨针刀疗法对CSR的作用机制。方法 将150只健康SPF级SD大鼠造模后，随机挑选120只随机分为正常组、模型组、普通针刺组、针刀治疗组，正常组和模型组正常饲养，针刀组给予针刀干预，电针组给予电针干预。治疗结束14天后取大鼠背根神经节，采用双抗夹心ELISA法检测各组背根神经节IL—1β、TNF—aand CGRP 含量。结果 与正常组比较，模型组IL一1β、TNF—α含量极显著升高(P<0.01)，CGRP含量显著升高(P<0.05)；与模型组比较，针刀组IL—1β、TNF—α和CGRP含量极显著降低(P<0.01)，电针组IL—1β、TNF—α含量极显著降低(P<0.01)，CGRP含量显著降低(P<0.05)；针刀组与电针组比较没有明显差异。结论 针刀疗法有明显镇痛和保护作用，其作用机理可能与其调节神经根局部炎症，促进神经元损伤、修复和再生有关。
关键词：针刀；神经根型颈椎病；IL—113；TNF—α；CGRP
文章编号：1673—8640(2018)—0030—02 中图分类号：681.5 文献标志码：B
神经根型颈椎病是在临床上属于颈椎病中比较常见的一种类型，其发病率约为60%—70%，并且近年来其发病率呈逐年上升的趋势和年轻化趋势。神经根型颈椎病的发病机制目前热仍尚不明确。其发病时主要症状表现为颈肩疼痛，并伴有颈项神经等部位针刺样的疼痛感，颈部的活动也明显受到限制，使得人们精神状态、工作以及日常生活均会受到一定的影响。临床中发现，运用针刀刺激颈椎神经根出口周围的肌肉及组织，可以明显缓解患者的疼痛症状，但作用机理尚不明确，这给临床推广带来了诸多困难。目前大量的临床研究证实针刀疗法治疗神经根型颈椎病疗效显著，但是在基础研究方面较为薄弱。本次实验通过观察神经根型颈椎病疼痛模型大鼠背根神经节IL—1β、TNF—αand CGRP的含量变化，探讨针刀疗法的消炎机制，具体分析如下；
材料
一、动物与分组 实验动物由柳州市中医医院动物实验中心提供的清洁级SD雄性大鼠120只，体质量(250±20)g，雌雄各半，动物生产许可证号为SCSK(桂)2015—0001。随机分为正常组、模型组、针刀组和电针组，每组30只。笼内饲养，室温(25±1)℃，每日12 h白天/黑夜循环。
方法
一、模型制备 模型复制方法采用郑钦安等神经根型颈椎病大鼠模型复制方法。将大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(30 mg/kg体重)，常规备皮、消毒、铺巾，以第2胸椎棘突为标记。以颈7为中心，沿棘突纵行切开皮肤及皮下组织，切口约为1.5 cm，用尖刀锐性分离棘突两侧的肌肉，暴露棘突及两侧椎板，用眼科剪刀剪断颈6、7两侧横突以上椎板，暴露出椎管内的脊髓，用神经剥离子将脊髓推向右侧，显露出左侧颈6、7神经根，将浸有福尔马林的定量滤纸片放在颈6、7神经根腋下。仔细止血，逐层缝合，无菌包扎。模型鼠建立后，大鼠表现动作不活跃。如有外在的惊动时，只能用右上肢及双下肢缓慢爬行，左上肢紧贴胸前，不敢触地，肘关节、腕关节不活动，第2、3趾紧缩。同时，用棉签轻触颈7神经根分布区，模型表现为身体迅速躲闪，并持续不断地嘶叫。
二、动物分组 术后第3天进行筛选，符合以下条件：①受损伤足轻触玻璃台面、不持重或轻微持重、走时跛行或足内收蜷缩畸形者；或者受损足抬起蜷缩、走动时不着台面计，无脊髓压迫症状，随机抽取120只大鼠进入实验，并随机分为4个实验组，即正常组、模型组、针刀治疗组、普通针刺组，每组30只。
三、干预方法 正常组正常饲养；模型组在模型复制成功后正常饲养；针刀组造模1天后给予针刀干预，选用HZ系列一次性使用针刀，在患椎上下棘间、患椎上下棘间旁开0.1 cm、患椎上下横突处及双侧坐骨神经出口处进行针刀操作，每周治疗3次，共治疗1周；针刺组造模1天后进行针刺治疗，根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的，取双侧C6、C7夹脊穴位于动物针灸穴位图谱，大鼠颈椎棘突间旁开约0.5 cm处)，选用华佗牌28号0.5寸不锈钢毫针，直刺进针，进针深度约0.3～0.6 cm，轻捻转提插，留针30分钟。
四、指标观察及检测
1.痛阈测定 机械痛域 用美国stoelting公司的Von Frey纖维测定。在造模及治疗后1、7、14d，在大鼠清醒状态适应环境后，以von Frey纤维垂直刺激大鼠患脚足趾第3、4跖骨间，纤维强度由小至大，出现抬足、躲避或舔脚动作为阳性反应，纤维弯曲90°无抬足反应为阴性反应，测定首先从2 g开始，当该力度的刺激下不能引起阳性反应，则给予相邻大一级力度的刺激，若能引起阳性反应，则给予相邻小一级力度的刺激，如此连续进行，直至产生第一次阳性反应和阴性反应的骑跨，再连续测定4次，最大力度为15 g，大于此力度记为15 g，每次刺激间隔30 s。同一只大鼠重复三次测量，间隔5分钟，取其均值。
2.IL—1β、TNF—α、CGRP测定 治疗结束后处死实验大鼠，完整切取受累侧G5RG及其部分传人、传出纤维，制成组织匀浆，用放射免疫法和免疫组化法分别测定匀浆中IL—1β、TNF—α、CGRP含量。
五、统计方法
所得数据使用SPSS21.0统计软件进行统计，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析进行统计学处理。检验显著性水平P<0.05。
结果
一、针刀疗法对神经根型颈椎病模型大鼠机械痛域的影响 对模型大鼠机械痛域值统计分析见表1，造模后患侧机械痛域值差异明显(P<0.05)。经针灸及针刀治疗后，患侧机械痛域值明显提高，到第14天时，针刀组患侧和健侧的机械痛域值没有明显差异(P>0.05)。0.05。, http://www.100md.com(王继 张鸿升 黄承军 徐敏)
关键词：针刀；神经根型颈椎病；IL—113；TNF—α；CGRP
文章编号：1673—8640(2018)—0030—02 中图分类号：681.5 文献标志码：B
神经根型颈椎病是在临床上属于颈椎病中比较常见的一种类型，其发病率约为60%—70%，并且近年来其发病率呈逐年上升的趋势和年轻化趋势。神经根型颈椎病的发病机制目前热仍尚不明确。其发病时主要症状表现为颈肩疼痛，并伴有颈项神经等部位针刺样的疼痛感，颈部的活动也明显受到限制，使得人们精神状态、工作以及日常生活均会受到一定的影响。临床中发现，运用针刀刺激颈椎神经根出口周围的肌肉及组织，可以明显缓解患者的疼痛症状，但作用机理尚不明确，这给临床推广带来了诸多困难。目前大量的临床研究证实针刀疗法治疗神经根型颈椎病疗效显著，但是在基础研究方面较为薄弱。本次实验通过观察神经根型颈椎病疼痛模型大鼠背根神经节IL—1β、TNF—αand CGRP的含量变化，探讨针刀疗法的消炎机制，具体分析如下；
材料
一、动物与分组 实验动物由柳州市中医医院动物实验中心提供的清洁级SD雄性大鼠120只，体质量(250±20)g，雌雄各半，动物生产许可证号为SCSK(桂)2015—0001。随机分为正常组、模型组、针刀组和电针组，每组30只。笼内饲养，室温(25±1)℃，每日12 h白天/黑夜循环。
方法
一、模型制备 模型复制方法采用郑钦安等神经根型颈椎病大鼠模型复制方法。将大鼠用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(30 mg/kg体重)，常规备皮、消毒、铺巾，以第2胸椎棘突为标记。以颈7为中心，沿棘突纵行切开皮肤及皮下组织，切口约为1.5 cm，用尖刀锐性分离棘突两侧的肌肉，暴露棘突及两侧椎板，用眼科剪刀剪断颈6、7两侧横突以上椎板，暴露出椎管内的脊髓，用神经剥离子将脊髓推向右侧，显露出左侧颈6、7神经根，将浸有福尔马林的定量滤纸片放在颈6、7神经根腋下。仔细止血，逐层缝合，无菌包扎。模型鼠建立后，大鼠表现动作不活跃。如有外在的惊动时，只能用右上肢及双下肢缓慢爬行，左上肢紧贴胸前，不敢触地，肘关节、腕关节不活动，第2、3趾紧缩。同时，用棉签轻触颈7神经根分布区，模型表现为身体迅速躲闪，并持续不断地嘶叫。
二、动物分组 术后第3天进行筛选，符合以下条件：①受损伤足轻触玻璃台面、不持重或轻微持重、走时跛行或足内收蜷缩畸形者；或者受损足抬起蜷缩、走动时不着台面计，无脊髓压迫症状，随机抽取120只大鼠进入实验，并随机分为4个实验组，即正常组、模型组、针刀治疗组、普通针刺组，每组30只。
三、干预方法 正常组正常饲养；模型组在模型复制成功后正常饲养；针刀组造模1天后给予针刀干预，选用HZ系列一次性使用针刀，在患椎上下棘间、患椎上下棘间旁开0.1 cm、患椎上下横突处及双侧坐骨神经出口处进行针刀操作，每周治疗3次，共治疗1周；针刺组造模1天后进行针刺治疗，根据中国针灸学会实验针灸研究会制定的，取双侧C6、C7夹脊穴位于动物针灸穴位图谱，大鼠颈椎棘突间旁开约0.5 cm处)，选用华佗牌28号0.5寸不锈钢毫针，直刺进针，进针深度约0.3～0.6 cm，轻捻转提插，留针30分钟。
四、指标观察及检测
1.痛阈测定 机械痛域 用美国stoelting公司的Von Frey纖维测定。在造模及治疗后1、7、14d，在大鼠清醒状态适应环境后，以von Frey纤维垂直刺激大鼠患脚足趾第3、4跖骨间，纤维强度由小至大，出现抬足、躲避或舔脚动作为阳性反应，纤维弯曲90°无抬足反应为阴性反应，测定首先从2 g开始，当该力度的刺激下不能引起阳性反应，则给予相邻大一级力度的刺激，若能引起阳性反应，则给予相邻小一级力度的刺激，如此连续进行，直至产生第一次阳性反应和阴性反应的骑跨，再连续测定4次，最大力度为15 g，大于此力度记为15 g，每次刺激间隔30 s。同一只大鼠重复三次测量，间隔5分钟，取其均值。
2.IL—1β、TNF—α、CGRP测定 治疗结束后处死实验大鼠，完整切取受累侧G5RG及其部分传人、传出纤维，制成组织匀浆，用放射免疫法和免疫组化法分别测定匀浆中IL—1β、TNF—α、CGRP含量。
五、统计方法
所得数据使用SPSS21.0统计软件进行统计，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析进行统计学处理。检验显著性水平P<0.05。
结果
一、针刀疗法对神经根型颈椎病模型大鼠机械痛域的影响 对模型大鼠机械痛域值统计分析见表1，造模后患侧机械痛域值差异明显(P<0.05)。经针灸及针刀治疗后，患侧机械痛域值明显提高，到第14天时，针刀组患侧和健侧的机械痛域值没有明显差异(P>0.05)。0.05。, http://www.100md.com(王继 张鸿升 黄承军 徐敏)
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