跟骨解剖型钢板内固定治疗跟骨关节内骨折的应用分析(3)

http://www.100md.com 2010年5月1日 《中国临床实用医学》

     1.2 细胞耐药性的测定 采用MTT法,体外常规培养A549及A549/CARP细胞,MTT法测定细胞存活率,根据公式:药物组光密度值/对照组光密度值×100%,观察卡铂作用后对A549细胞株和耐药株细胞增殖的影响。

    1.3 免疫组化实验 采用北京中山SP法试剂盒检测。无菌载玻片置于培养皿中,加入2×104~2×105个细胞悬液,培养12 h,细胞爬片生长,PBS洗涤;丙酮4℅固定15 min,免疫组化具体步骤参照说明书进行。

    1.4 结果判断 胞核或胞浆染成棕色颗粒为样性细胞;选择5个具有代表性的高倍视野,计数100个细胞中阳性细胞个数/HPx5作为统计数据。所有照片均采用免疫组化SP法×200。

    1.5 统计学处理 检测数据以x±s表示,采用SPSS11.5统计软件包处理,采用Student非配对F检验,检验水平α=0.05。

    2 结果

    2.1 检测细胞耐药性 存活率与光密度值呈正比,随药物剂量的增加,A549存活率较A549/CARP明显降低,A549/CARP对卡铂低度敏感,形成耐药细胞系0.29±0.19,0.59±0.14,P<0.01。

    2.2 免疫组化 A549/CARP组LRP表达明显高于A549组,有显著性差异P<0.01,阳性率分别为24%和34%;A549/CARP组MRP表达明显高于A549组,有显著性差异P<0.01阳性率分别为22%和30%;A549/CARP组STAT5与A549组比较,无显著性差异(P>0.05),阳性率分别为29%和33%。A549/CARP组经相关分析STT5与LRP无相关性(r= 0.321,P>0.05),STAT5与MRP无相关性(r= 0.254,P>0.05)A549/CARP组经相关分析,MRP与LRP无相关性(r= 0.061,P>0.05)。

    3 讨论

    STAT5是影响细胞增殖、分化、凋亡的一类潜在的转录因子,迄今为止,在哺乳动物中发现STAT家庭包括7个成员,即STAT1 6,其中STAT5包括STAT5A和STAT5B。STAT5在唾液腺、胰腺上皮细胞等外分泌器官缺乏,而在内分泌器官STAT5却特异表达[1],被定义为一个新的癌基因[2]。STAT5具有多种功能,如参与造血调控、免疫系统调节等,其持续活化与肿瘤的发生、发展密切相关、是近年来研究热点。

    本研究采用卡铂作用于A549细胞株,通过浓度梯度递增法诱导形成A549/CARP耐药细胞系,获得了自行构建的耐药株。我们采用免疫组化技术检测A549及耐药株A549/CARP中LRP、MRP的表达水平,了解二者介导细胞耐药性的产生情况和相关性的分析,证实A549/CARP细胞系中存在LRP、MRP的过度表达,且二者有显著性差异。而未经化疗药物诱导的细胞株(A549)亦有一定的阳性表达,提示LRP、MRP是产生原发性耐药的机制之一。本实验未证明LRP的表达与MRP有相关性,与文献报道有差异[3],可能与以下因素有关:①体外培养细胞传代中产生的耐药性变异;②细胞固定条件;③标本来源不同。另外,LRP和MRP的表达在体外培养与组织切片之间是否有差异国内外未见相关研究,因此对它们之间是否具有相关性,还有待进一步探讨。

    STAT5通过阻止细胞凋亡来促进肿瘤形成,有潜在抗化疗作用[4]。近年研究显示,在多种人类肿瘤细胞中,STAT5表现出成组性满打激活。故有报道认为抑制STAT5的活化不仅能防止肿瘤的发展,还能增强肿瘤细胞对化疗的敏感性。本研究采用免疫组化和蛋白印迹法,在A549T与A549/CARP中均可检出STAT5 蛋白的表达,提示STAT5介导了细胞增殖、分化、凋亡受阻,但STAT5在卡铂诱导前后的持续性激活无显著差异,提示STAT5并未介导细胞的耐药。如果能将靶向性地阻断STAT5信号的物质与传统的药物结合使用,可能会使抗肿瘤治疗更为有效。活化的STAT5对肿瘤细胞的形成、生长、凋亡抑制等过程起着重要的调控作用。因此,可通过破坏STAT5信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖。我们的工作初步揭示了STAT5与肿瘤多药耐药等方面的关系,为肺癌以STAT5为靶向的基因治疗提供了重要的理论与实验依据。

    参考文献

    [1] Nevalainen MT,Xie JW,Bubendof L,et al.Basal activation of transcription factor signal transducer and caticator of transcription(STAST5)in non pregnant mouse and human breast epitheliur.molecular Endocrinology.

    [2] Ren S,Cai HR,Li M,et al.Loss of Stat5a delays mammary cancer progressionin a mouse model.Oncogene,2002,21(27):4335 4339.

    [3] 王杰,刘叙议,蒋薇,等.LRP、MRP、MDRI基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义,中华肿瘤杂志,2000,22,(4):304 307.

    [4] Cathett falcone R,Dalton WS,Jove R.STAT proteins as noveltargets for cancer therapy.Signal transducer activator of transcription.Curr opinoncol,1999,11(6):490 496.(游长江 赵云青 胡学斌 易自力)

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