吕显林 王琴 陈清 陶亮

    大黄素对Cx32组成的细胞缝隙连接通讯功能的影响

    吕显林 王琴 陈清 陶亮

    目的在转染并稳定表达Cx32的Hela细胞上，观察大黄素对Cx32的GJIC以及Cx32蛋白表达水平的影响。方法 采用SRB法检测不同浓度大黄素对Hela细胞的毒性;用细胞接种荧光示踪法(“parachute”dye-coupling assay)观察不同浓度大黄素对GJIC的影响;用western blot法研究大黄素在影响GJIC功能浓度范围内对Cx32蛋白表达的影响。结果大黄素在0～1μmol/L浓度时对Hela细胞无毒性作用;大黄素(24～600nmol/L)预处理4 h，能浓度依赖性地增强GJIC及Cx32蛋白表达量。结论大黄素能够增强Cx32的细胞GJIC;此增强作用可能与其增加Cx32蛋白表达水平有关。

    大黄素;缝隙连接蛋白;缝隙连接通讯

    细胞缝隙连接(gap junction，GJ)是相邻细胞间的一种蛋白质通道结构。该通道两端分别开口于相邻的细胞胞浆中，由各自细胞包膜上6个连接蛋白(connexin，Cx)围绕中央孔组成的“半通道”对接而成。其重要功能是缝隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication，GJIC)，沟通相邻细胞的胞浆，允许细胞浆中分子量<1kDa的小分子物质，包括细胞代谢产物及细胞第二信使等通过，从而同步细胞活动、协调各细胞间活性和功能、控制细胞的生长和发育等生命过程[1]。GJ通过Cx结构和功能的变化而导致的细胞间信号转导异常，与神经系统疾病、心血管疾病、肿瘤、视力和听力障碍的发生密切相关[2，3]。因此，能纠正GJ功能异常的化合物有望成为治疗上述疾病的新型药物[4]。

    大黄素具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化及清除氧自由基和保肝作用，还可抑制多种肿瘤细胞增殖，增强药物的细胞毒性作用，但其对GJ功能及Cx蛋白表达的影响尚未见报道。本文旨在研究大黄素对Cx32组成的GJ功能的影响。

    1 资料与方法

    1.1 试剂 大黄素购于自中国药品检验所;抗HA抗体购自Sigma;多西环素购自Calbiochem;HRP标记的羊抗小鼠二抗、硝酸纤维素膜(NC膜)购于Amersham;ECL-plus化学发光剂购于Bio-rad;Calcein-AM和CM-DIL购自Molecular Probes ......