王全懂 张蕾 杨聪颖

    胶质细胞瘤约占颅内原发恶性肿瘤的40% ～50%，其不可控制的生长、较强的侵袭转移能力等生物学特性致使肿瘤易复发，预后差。细胞外基质完整与否以及肿瘤组织的血管发生是肿瘤细胞侵袭、转移的关键因素。基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9 MMP-9)在细胞外基质降解中发挥重要作用，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)在诱导血管发生中起关键作用。多项证据显示二者在多种肿瘤细胞表达并与肿瘤细胞的侵袭、转移密切相关。本研究采用免疫组织化学的法观察MMP-9及VEGF在胶质瘤中的表达，并探讨其临床病理意义。

    1 材料与方法

    1.1 一般资料 标本选自我院病理科63例胶质瘤存档蜡块。术前未接受放疗、化疗。其中，星形细胞瘤46例，胶质母细胞瘤13例，少突胶质细胞瘤3例，混合细胞瘤1例，男性33例，女性30例;年龄5～70岁，平均年龄43.3岁。术后病理分级:Ⅰ级10例，Ⅰ～Ⅱ级7例，Ⅱ级13例，Ⅱ～Ⅲ级9例，Ⅲ级8例，Ⅲ～Ⅳ级2例，Ⅳ级14例。所有的病例术前均未进行放疗和化疗。为统计学方便，把Ⅰ级、Ⅰ～Ⅱ级、Ⅱ级归类为高分化胶质瘤，Ⅱ～Ⅲ级、Ⅲ级、Ⅳ级归类为低分化胶质瘤。

    1.2 试剂与实验方法 标本经福尔马林固定、石蜡包埋后，组织作5 μm连续切片，行免疫组织化学ABC法染色。兔抗人MMP-9及VEGF蛋白多克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司，二抗、三抗购自北京中山生物技术有限公司，染色过程如下:将瘤组织石蜡切片脱蜡入水，0.3%的甲醇-双氧水中10 min;分别将瘤组织切片浸入兔抗人MMP及VEGF抗体(1∶500 Santa Cruze)溶液中封闭;随后依次进入生物素化IgG工作液(北京中山)和SABC三抗工作液(北京中山)，室温下各孵育2 h;辣根过氧化物酶标记的DAB将免疫产物显为棕黄色;梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。在孵育过程中用PBS溶液代替一抗做空白对照。

    1.3 染色结果判断 用光学显微镜观察并确定MMP-9及VEGF免疫阳性产物分布部位。每份标本随机取三张切片，每张切片随机取三个高倍视野，计数每张切片MMP-9及VEGF阳性细胞数目并观察染色强度，以肿瘤细胞胞浆、细胞间质及血管内皮细胞出现棕黄色颗粒为MMP-9、VEGF表达阳性 ......