陈文江

    自1981年确认第1例艾滋病以来，发病率急剧上升，目前全球大约有6000万人感染HIV，其中死亡2000多万。研究表明，天然的HIV-1包膜蛋白以三聚体的形式存在于病毒颗粒和感染细胞的表面[1]，所以，获得模拟天然构象的抗原蛋白对于改善包膜的免疫原性，研究包膜糖蛋白的生物学特性，为研制有效的HIV-1包膜疫苗、研究包膜糖蛋白的结构及功能提供前期基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 质粒pBluescript SKII：原核表达载体，购自上海生工生物技术有限公司；质粒pcT-MTQ(由哈医大病原课题组构建)：含有CMV启动子、tPA信号肽和蛋白质三聚化模序MTQ的质粒；HIV-1原代分离株06044：R5亲嗜性，分离自黑龙江省 HIV-1感染者；宿主菌：大肠杆菌 JM109；HEK293T 细胞(ADCC No.CRL-11268)；PrimeSTAR HS DNA Polymerase(日本 TaKaRa)；限制性内切酶 EcoR I、Nhe I、Xho I(日本TaKaRa)；T4连接酶(美国 Invitrogen)；DL2000 DNA Marker(日本 TaKaRa)；ZyppyTM Plasmid Miniprep Kit(美国Zymo Research)；PCR引物(上海生工生物技术生物公司)；

    1.2 方法

    1.2.1 HIV-1 06044株gp120真核表达载体的构建

    1.2.1.1 构建策略 首先按照真核细胞基因偏嗜性进行包膜基因密码子优化。PCR扩增包膜gp120基因，PCR产物上下游分别引入EcoR I和Xho I位点，克隆至pcT-MTQ载体的EcoR I和Xho I位点之间 ......