李秋元 林晓斌 陈杰武 郭光华

    AKT又称蛋白激酶(PKB), 其活性形式为磷酸化蛋白激酶B(P-Akt), 位于多种基因信号通路的核心部位, PI3K/AKT信号通路广泛存在于细胞中, 是参与细胞生长﹑增殖﹑凋亡﹑分化调节的重要信号通路, 研究发现, FR在人食管癌细胞中异常高表达[1], 而hnRNP-E1作为FR的转录调节因子, 在小鼠的乳腺上皮癌中, hnRNP-E1与PI3K/AKT信号通路存在一定的关系, 但在人食管癌细胞中是否存在关联目前尚未报道。本实验通过PI3K/AKT信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌EC109细胞作用, 以探讨PI3K/AKT信号通路与FR表达之间的关系。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人食管癌细胞系EC109由汕头大学医学院第一附属医院分子生物学实验室培养, LY294002﹑胰蛋白酶(江苏碧云天)﹑胎牛血清(杭州四季青), RPMI1640(无叶酸)(GIBCO公司), 二甲基亚砜﹑四甲基偶氮唑蓝(MTT)﹑AKT,P-Akt抗体 (CST)﹑hnRNP-E1(Santa Cruz), FR 抗体 (ENZO)。

    1.2 方法

    1.2.1 LY294002工作液的配置及细胞培养 将20 μL(10 mg/ml)LY294002 溶液加入到 630 μLPBS 中 , 稀释成 1000 μmol/L 的溶液, 置于-20℃冰箱中储存, 使用前再稀释成指定浓度, 将食管癌细胞EC109加入含10%胎牛血清的无叶酸RPMI1640培养基中, 置于37℃, 5%CO2饱和湿度条件下培养, 每2～3 d传代一次 ......