林增平 钟继平 聂达荣

    1 材料与方法

    1.1 材料 ①DMEM/F12细胞培养基、优质原装进口100%胎牛血清、0.25%胰酶-0.02%EDTA细胞消化液(美国GIBCO公司)。②正转化生长因子β-1(TGF-β1)、生长因子[IGF-I(美国Peprotech公司)]。③1.075 g/ml人淋巴细胞分离液(津脉基因测绘技术有限公司)。④Ⅱ型胶原免疫组化试剂盒(Boster)。⑤FICT标记鼠抗人CD44、CD45单克隆抗体(晶美生物)。

    1.2 方法

    1.2.1 取材 人骨髓10 ml, DMEM/F12稀释1倍, 与人淋巴细胞分离液1：2混合, 密度梯度离心(2000 r/min)10 min, 吸取中间层的单核细胞(呈云雾状), 再离心(2000 r/min)5 min。使用完全培养液将沉淀物制成密度为1×105/ml的悬浮液。吸取6 ml该细胞悬浮液, 置入培养箱中培养, 每3天换液1次,镜下观细胞达90%～95%左右融合时, 用细胞消化液消化, 1：3传代, 传代培养时, 细胞的密度为8×103/cm2较为适宜(注：完全培养液：DMEM/F12中含10%的胎牛血清(FBS)+维生素C 0.05 g/L+青霉素10 U/L+链霉素0.1 g/L ......