张 艳 盛安琪 刘文涛 胡 亮 陶学有 张广钦

    原花青素抑制小胶质细胞活化缓解阿片药诱导的痛觉过敏

    张 艳 盛安琪 刘文涛 胡 亮 陶学有 张广钦

    目的 探讨原花青素(PC)对小胶质细胞活化和阿片药诱导的痛觉过敏(OIH)的影响及其分子机制。方法 采用甩尾法检测OIH小鼠甩尾痛阈；免疫荧光法和Western blot法检测小鼠脊髓水平小胶质细胞标记分子(Iba1)表达水平。结果 将小鼠分为吗啡组、吗啡加PC给药组(20、 40、 80 mg/kg)和对照组(给予等体积生理盐水)。实验结果表明, 小鼠OIH造模后, 基础阈值由(9.35±0.48)s降至(5.47±0.39)s, 而对照组没有明显改变, 表示模型建立成功。提前15 min PC灌胃给药能够改善吗啡引起的OIH。40 mg/kg给药组灌胃给药2 d后小鼠热痛阈值与模型组相比, 差异具有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 药物 PC(南京泽朗医药植提技术有限公司)；吗啡(沈阳第一制药厂)。

    1.2 动物 30只健康雄性ICR小鼠, 体重18~22 g, 由江苏省南京青龙山动物繁殖场提供, 实验动物许可证号：SYXK(苏 )2016-0011。

    1.3 仪器 荧光显微镜(Zeiss AX10)；电泳仪(Bio-Rad)；化学发光仪(ChemiDoc XRS+)。

    1.4 方法

    1.4.1 OIH模型小鼠的制备及行为学测定 皮下注射10 mg/kg吗啡, 连续注射5 d, 2次/d 。以造模前1 d测得的小鼠热痛阈值作为基础痛阈。测量3次, 间隔10 min, 取平均值。以造模后热痛阈值较基础痛阈下降>20%者视为OIH模型成功。具体方法如下：将小鼠尾1.5~3.0 cm浸入恒温水浴中(47±0.5)℃, 用秒表记录鼠尾自浸入水中到出现甩尾动作的时间, 为防止组织损伤, 若小鼠10 s未甩尾, 则记为10 s。

    1.4.2 Western blot法检测Iba1蛋白水平的表达 于第5天给药后取小鼠脊髓L4~6节段；按一定比例加入裂解液, 处理样品, 经聚丙烯酰胺凝胶电泳, 转移至PDVF膜上, 10%脱脂奶粉室温封闭1.5 h, 加入一抗过夜, TBST洗后二抗孵育2 h,TBST洗后显色 ......