许光辉 黄亦琦 庄媛 戚欢阳 赵淑飞 马雪云

    家蚕治疗消渴病的历史悠久, 在国内外传统药物记载中亦不乏关于家蚕治疗消渴病的介绍, 如《本草纲目》对家蚕描述有：蚕蛹, “煎汁饮, 止消渴”；蚕茧, “煮汁饮, 止消渴”；缫丝汤, “止消渴, 大验”等[1,2]。目前文献表明, 在治疗糖尿病等相关疾病方面, 家蚕均以幼虫的全体的冻干粉末入药, 但少见有关家蚕有效成分提纯、精制的研究。本研究在开展家蚕提取、精制基础上进一步对有效成分家蚕醇提物(silkworm alcoholic extract, SAE)在细胞水平开展药效活性研究。现报告如下。

    1 材料与方法

    1.1SAE的制备 取一定量的5龄蚕, 经冷冻干燥、粉碎制备成家蚕冻干粉, 加10～30倍的70%乙醇水溶液, 充分搅拌, 浸泡 2 h, 超声 10 min, 重复 3次, 间隔 10 min/次, 过滤 ；沉淀再按以上方法提取1次；将2次滤液合并, 减压浓缩成含有家蚕1 g/ml的贮液, 4℃保存, 用前DMSO稀释至所需浓度, 22 μm滤膜过滤除菌。

    1.23T3-L1前脂肪细胞的培养与分化、脂肪细胞IR模型的复制 3T3-L1前脂肪细胞接种于培养皿中, 用含10%胎牛血清(FBS)的高糖DMEM培养基培养, 隔天换液；待细胞长满至完全融合48 h后, 采用分化培养基开始进行分化, 隔天换液；分化72 h后更换含100 ng/ml Insulin的维持培养基,隔天换液；维持培养基培养10 d后, 95%以上的细胞完全分化为成熟的脂肪细胞。

    分化成熟的脂肪细胞在含有0.2 nM TNF-α的维持培养基培养96 h后, 可成功复制成IR模型[3] ......