刘良田 许海涛 唐永华

    原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一, 我国每年死于肝癌的患者超过11万, 已占我国肿瘤死因的第2位[1]。有资料表明, IRX1、IRX2与肝癌细胞发展相关[2]。本次研究分析肝癌细胞中IR X1、IRX2表达情况, 观察其对细胞免疫功能的影响, 以期为肝癌的治疗提供一个新的方向。现报告如下。

    1 资料与方法

    1.1 标本来源 选择本院和光明新区等医院2014年2月～2017年8月收治的60例进行HCC手术患者的新鲜标本作为研究对象, 所有患者术前均未接受放化疗。

    1.2 方法

    1.2.1 标本采集 60例HCC标本均取癌组织、癌旁组织和远癌肝组织,肉眼观距肿瘤边界2 cm以内的非癌组织为癌旁组织, 2 cm以上为远癌肝组织。所有标本离体后立即取0.5 cm×0.5 cm 大小的组织块, 迅速置于液氮罐中, 于-80℃低温冰箱内保存, 以备检测。

    1.2.2 临床资料收集 收集患者性别、年龄、肿瘤大小、是否包膜、肿瘤分化程度、有无镜下脉管癌栓、复发情况、甲胎蛋白(AFP)、是否合并乙肝或淋巴结转移、是否有肝硬化、TNM分期、术后生存时间。

    1.2.3 SP法检测 根据SP检测说明书按照步骤进行操作, 结果判断：染色后的切片采取双盲的方法, 由两位病理医师根据染色的强度和阳性细胞的百分比, 独立进行半定量评分(HSCORE), 若切片 HSCORE>100 判断为阳性,HSCORE≤100 判断为阴性。

    1.2.4 RT-PCR检测 ①总RNA的提取：采用Simply P总RNA提取试剂盒说明书提取两种细胞的总RNA。②互补脱氧核糖核酸(cDNA)的合成：按照cDNA合成说明书进行。③PCR反应及凝胶电泳：根据说明书进行。

    1.3 检测标本及指标

    1.3.1 肝癌及癌旁组织检测 以60例肝癌组织和60例癌旁组织为研究对象, 采用RT-PCR法检测IRX1、IRX2mRNA表达情况, 采用SP法检测IRX1、IRX2蛋白表达情况。

    1.3.2 肝癌组织检测 以60例肝癌组织为研究对象, 采用SP法检测IRX1、IRX2蛋白表达情况, 并将60例肝癌组织按照病理分期分为高分化组21例、中分化组20例、低分化组19例, 比较其IRX1、IRX2蛋白表达差异 ......