徐瑾 李卫红 陈国斌

    作者单位：518028 深圳市妇幼保健院妇科

    子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤, 我国每年约有超过100000的新发病例, 是严重危害女性健康的常见恶性肿瘤[1]。化疗是宫颈癌的重要治疗方式, 以铂类药物为基础的化疗是宫颈癌化疗的一线选择, 其中顺铂是常用的宫颈癌化疗药物[2]。肿瘤细胞耐药可致化疗欠佳, 使患者得不到有效的治疗而死于癌症；化疗药物耐药是目前肿瘤治疗面临的难题, 但肿瘤耐药的机制目前尚不清楚。恶性肿瘤细胞由于生长迅速而使细胞微环境处于缺氧状态, 缺氧可使瘤细胞对化疗的抗性增加, 故目前研究认为肿瘤细胞微环境缺氧是肿瘤产生耐药的重要原因[3,4]。缺氧诱导因子1α(hypoxia induced factor 1α, HIF-1α)是细胞在缺氧状态下稳定表达的核转录因子, 可在转录水平调控诸多靶基因的表达从而导致肿瘤细胞的化疗耐药, 已报道与多种恶性肿瘤铂类耐药有关[4,5]。但在宫颈癌方面研究报道较少, 本研究拟siRNA沉默宫颈癌Hela细胞的HIF-1α基因, 观察缺氧培养条件下hela细胞对顺铂的敏感性, 探讨宫颈癌顺铂耐药的机制, 为减少宫颈癌化疗耐药提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 顺铂(上海阿拉丁生化科技股份有限公司), Lipofectamine3000(Invitrogen), CCK-8(上海碧云天),RT-PCR试剂盒(TAKARA), HIF-1α试剂盒(Abcam),AnnexinV-FITC-FITC/PI凋 亡 检 测 试 剂 盒 (solarbio)。HIF-1α siRNA 由上海吉玛制药技术有限公司合成, 包含1条目的 siRNA链和1条阴性对照, si-HIF-1α：Forward：5’GATCCCGCACAGTTACAGTA TTCCATCA AGAGTG GAATACTGTAACTGTGCTTTITT-3’, Reverse：5’-CTAGAAAAAAGCACA GTTACAGTATCCACTCTTGATGGAAT ACTGTAACTGTGCGG-3’。引物由上海生工合成。三气培养箱(NU4950型), 荧光定量PCR仪(BIO-RAD), 酶标仪(美国BIO TEK), 流式细胞仪 (BIO-RAD), 超灵敏度化学发光成像系统(BIO-RAD)。

    1.2 细胞培养 宫颈癌细胞株Hela细胞购于中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所细胞库, 用含10%胎牛血清的RPMI Medium 1640 basic培养基培养, 青霉素和链霉素浓度均为100 U/ml, 在37℃、5%CO2的培养箱中培养 ......