罗单

    恶性黑色素瘤 (malignant melanoma,MM) 是一种起源于黑色素细胞或黑色素细胞源性细胞的皮肤肿瘤[1]。尽管恶性黑色素瘤仅占所有皮肤肿瘤的小部分,但由于其不良的预后和较高的死亡率(占所有皮肤癌死亡人数的65%),目前已经成为全世界最具侵害性和最易致命的皮肤癌之一,同时也是全球人类健康不容忽视的危害。达拉非尼是一种已经被批准使用于治疗Ⅲ/Ⅳ期和转移性恶性黑色素瘤的小分子靶向药物,但是根据多项报道认为,恶性黑色素瘤患者在服药以后会较快出现耐药性,因此对于临床效果来说是有一定限制的[2]。实际上,目前很多专家认为耐药性已经成为了治疗恶性黑色素瘤的主要挑战之一,因此要找到耐药机制。当然,癌症的耐药机制是复杂多元化的,很多研究认为主要原因就是机体氧化应激反应、细胞自噬与凋亡,以及遗传的不稳定性所导致的[3,4]。本研究从自噬角度出发,对黑色素瘤来源的外泌体miR-23a 在黑色素瘤达拉非尼耐药中的机制进行分析和研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料 购买的细胞为美国American Type Culture Collection 的恶性黑色素瘤细胞系A375；所用主要实验试剂包含如下：美国Sigma-Aldrich 公司的达拉非尼,美国Cell Signaling Technology 生产的抗裂解PARP、抗LC3Ⅰ/Ⅱ和物种特异性二抗,美国LI-COR Biosciences公司生产的DMEM 培养基,美国Thermo Fisher Scientific 公司生产的胎牛血清和双抗；所用主要仪器设备包含如下：美国Nikon 公司生产的PCM 2000 共聚焦显微镜,上海力申公司生产的台式高速离心机,美国BioTek 公司生产的酶标仪,美国伯乐公司生产的蛋白电泳仪、SDS-PAGE 凝胶电泳仪,上海培清科技有限公司生产的化学发光仪。

    1.2 方法

    1.2.1 达拉非尼处理 选择恶性黑色素瘤细胞系A375,再用(0、30、100、300 nM)浓度的达拉非尼对其进行24 h 处理 ......