胡月

    流感病毒属于正黏病毒科,依据其外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性不同,目前可分为若干个亚型(H1～H16,N1～N9)[1],H1N1 是感染人的最主要甲型流感病毒,是临床上最常见的引起上呼吸道感染的流感病毒株,临床上表现为突发高热、咳嗽、咽痛、流涕或鼻塞、头痛、肌肉和关节痛、全身不适等多种流感样症状,影响患者的工作和生活[2]。目前,流感疫苗仍是最主要的流感预防措施,但因为流感病毒在不断变异,存在疫苗的研究和生产跟不上病毒变异速度的问题[3]。西药抗病毒毒副作用大,特异性低,易于产生耐药。中医药防治流感病毒临床诊治经验丰富,疗效确切,毒副作用低,患者接受度高。本研究委托中国科学院武汉病毒研究所,以利巴韦林为阳性对照,在MDCK 细胞水平上,评价儿童清咽解热口服液对H1N1及H1N1 奥司他韦耐药株流感病毒的抗病毒作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 药物与试剂

    1.1.1.1 受试药物 儿童清咽解热口服液,由亚宝药业四川制药有限公司生产,批号171041。

    1.1.1.2 对照药物 利巴韦林标准品,购置于大连美仑生物科技有限公司,批号20160518。

    1.1.1.3 试剂和仪器 ①试剂：DMEM 培养基(Life Science: Cat.No.12800-17,Lot No.1837973)、FBS(Biological Industry: Cat.No.04-001-1ACS-500 ml,Lot No.1837973)、青-链霉素(碧云天：Cat.No.ST488,配置成200000 U/ml)、DMEM 完全培养基(DMEM+10%FBS+100 U/ml PS)、RPMI1640 完全培养基(RPMI1640+10%FBS+100 U/ml PS)、磷酸盐缓冲液(1000 ml ddH2O中加入NaCl 8.1816 g,KCl 0.2 g,Na2HPO4·12H2O 3.58 g,KH2PO40.24 g,搅拌溶解,调pH 至7.3)、胰酶(Trypsin)、CellTiter GloTM(Promega,货号：G7572,Lot No.0000158064)。②仪器及实验环境：二氧化碳(CO2)培养箱(Thermo)、生物安全柜(哈东联)、酶标仪(PerkinElmer,型号Envision)、细胞计数仪(Bio-Rad,型号TC10TM)、倒置显微镜(Zeiss Observer,型号A1)、高内涵细胞分析仪(PerkinElmer HCS) ......