陈佩 胡小云

    已知多种中草药具广谱抗病毒作用,尤其是清热解毒类中药,包括板蓝根、鱼腥草、金银花、穿心莲和野菊花等,对多种病毒具抑制作用,如呼吸道合胞病毒(HSV)、甲型流感病毒、单纯疱疹病毒和登革热病毒(DEN)等。这些药物的活性成分或直接作用于病毒,或通过调节机体免疫系统实现抗病毒作用。迄今为止,已报道的活性成分以化学物质为主,例如板蓝根中的靛蓝对HSV 具显著抑制效果；鱼腥草中的黄酮类成分可抑制多种病毒,其中金丝桃苷可有效抑制DEN；野菊花中的野菊花黄酮对人类免疫缺陷病毒(HIV)的抑制效率甚至高于病毒唑[1]。

    MicroRNA 是一类内源性的、长度为21～25 nt 的单链小分子RNA,广泛存在于真核生物中,具高度保守性；在生物体内,microRNA 通过与mRNA 完全或不完全互补,在转录后水平发挥生理作用。从2002 年证实植物中microRNA 的存在以来,植物microRNA 领域研究进展迅猛。在药用植物领域,自从2015 年Zhou等[2]发现金银花来源的植物microRNA,miR2911 可通过口服途径进入动物体并抑制水痘-带状疱疹病毒的复制,植物microRNA 对动物体的“跨界调控”作用逐渐成为研究热点。多种药用植物中具跨界调控活性的microRNA 被发现。邵红伟等[3]报道,甘草miRNA 对人外周血单核细胞(PBMC)的生长具有促进作用,并能显著增加HLA-DR+细胞亚群的比例；Yang 等[4]发现,丹参中的Sal-miR-1 和Sal-miR-3 可在小鼠中调节OTUD7B/KLF4/NMHC ⅡA 轴,抑制血管重构。

    然而,上述对具跨界调控活性植物microRNA 的研究皆属于对作用机理的探索,含活性植物microRNA 受试物的制备仅限于实验室规模,经验尚不能支持工业化规模生产,亦不清楚将活性植物microRNA 作为有效成分的工业规模产品在质量控制和有效性方面的可行性。本研究以含miR2911 的清热解毒类中药为原料,确立了一套以miR2911 为有效成分的新型抗病毒产品的制备工艺,并对以本制备工艺生产的产品进行了质量及稳定性研究,皆获得了积极结果。

    1 材料与方法

    1.1 样本中miR2911 含量的检测

    1.1.1 样本处理 取1～10 g 样本,200 ml 沸水溶解,过滤后取50 μl 上清提取,600 μl 水洗脱。TRizol 法提取核酸。

    1.1.2 实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)条件 引物、探针序列：R ：gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactgg atacgactcccag；UR：agtgcagggtccgaggtatt；F：aatacggggga cgggct ......