张献棣 陈明军

    作者单位：212000 江苏大学京江学院检验科

    食管癌是常见恶性肿瘤类型, 全球每年新发约60 万例, 因其死亡人数超54 万例, 其中我国约占50%[1]。由于早期症状不明显, 缺少浆膜易侵犯和转移, 治疗后复发率较高, 食管癌患者5 年总体生存率为25%～47%[2,3]。目前在新辅助以及中晚期食管癌患者综合治疗方案中化疗无疑发挥着关键作用, 因此提高化疗效果以及识别早期复发的危险因素将对最终改善患者预后有重要的意义。溴结构域蛋白4(bromodomain containing 4, BRD4)是识别蛋白赖氨酸乙酰化残基的关键结构蛋白, 可广泛调节表观遗传修饰和基因转录的众多分子进程, 近来被认为是淋巴瘤、肝癌、胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤的潜在治疗靶标, 但其在食管癌发生、发展过程中的作用研究较少[4-7]。本研究中首次聚焦于BRD4 对食管癌化疗敏感能力的影响, 基于生物信息学数据分析BRD4 在食管癌中的表达水平及其与化疗药物关键解毒酶GSTP1 之间的联系, 结合靶向处理探究BRD4 在食管癌细胞顺铂敏感性调控中作的作用及相关分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞及培养条件 TE-1 购自于上海中乔新舟生物科技, 并附有短串联重复序列鉴定检验报告；TE-1 细胞培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)1640 基础培养基, 添加终浓度为1%青霉素和链霉素(双抗), 置恒温培养箱37℃、5% CO2条件下培养和传代。

    1.1.2 主要耗材和试剂 细胞及转染专用Opti MEM 培 养 基、双 抗( 美 国Gibco 公 司)；FBS( 以 色列Biological Industries 公司)；磷酸盐缓冲溶液(PBS)、二甲基亚砜(DMSO)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、细胞高效RIPA 裂解液、Western blot 实验相关试剂(北京索莱宝公司)；蛋白酶抑制剂Cocktails(美国ApexBio 公司)；高敏型ECL 化学发光检测曝光液、180 kDa 蛋白Marker(南京诺唯赞公司)；顺铂(Cisplatin, DDP)、(+)-JQ1 粉剂(上海Selleck 公司)；一抗稀释液(苏州新赛美生物科技有限公司)；兔抗人B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma 2, Bcl-2)、Bcl-2 关联X 蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、谷 胱 甘 肽 硫 基 转 移 酶P1(Glutathione S-transferase P, GSTP1) 和 鼠 抗 人GAPDH抗体(武汉三鹰公司)；兔抗人半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 切割体(cleaved-caspase-3)抗体(美国CST 公司)；兔抗人BRD4 抗体(美国abcam 公司)；HRP 偶联的抗鼠和抗兔二抗(南京川博公司)； LipofectamineTM2000 转染试剂(美国ThermoFisher 公司)；siRNA-BRD4(5'-GGAGA UGACAUAGUCUUAATT-3')、siRNA-GSTP1(5'-ACACC GTGGTCTATTTCCCAGTTCG-3')以及阴性对照(上海生工生物工程有限公司)；增强型CCK-8(上海碧云天公司) ......