杨玲 翁旭亮 曾婷 王成银 刘青 邱铃铃 雷源

    阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病[1]。临床上以记忆障碍、计算力下降、理解力下降、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍及人格和行为改变等全面认知功能下降表现为特征。世界卫生组织报道, 预计到2050 年, AD 患病人数将高达1.52 亿, 为目前全球五大死因之一[2], 给社会和家庭带来了极大的经济和社会负担。随着人口老龄化现象越来越严重,延缓AD 的发展及预防AD 的发生已成为目前关注的焦点问题。AD 的病理特征主要表现为由β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein, Aβ)沉积引起的老年斑(senile plaque, SP)、神经细胞tau 蛋白过度磷酸化引起的神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)和神经元的丢失[3]。其中Aβ 在脑内异常增多聚集产生神经毒性是AD 的始动与中心环节[4]。健脑增智饮是广州医科大学附属中医医院脑病科的科内膏方制剂, 课题组在前期的临床研究中发现, 其对认知功能障碍有着明显的改善作用, 可显著改善认知障碍患者的记忆力、认知功能及日常生活能力, 改善血清S100 蛋白和AchE 指标[5,6], 但其具体的作用机制尚未开展基础实验研究。临床仍需更进一步的研究以阐明其对AD 认知功能障碍的具体调控机制, 为其进一步的临床应用提供充分的科学理论依据。本研究拟采用Aβ1-42 构建AD 细胞模型, 通过检测AD 细胞模型的细胞活性及凋亡水平, 进一步探讨健脑增智饮治疗AD 的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 健脑增智饮的制备 健脑增智饮(组方：熟地黄20 g, 茯苓15 g, 巴戟天、山茱萸、石斛、肉苁蓉、麦冬、石菖蒲、远志、川芎、丹参、赤芍各10 g, 五味子、生姜、大枣各6 g)复方内含的所有药材均由广州医科大学附属中医医院中药房提供, 采用自动循环煎药机提取浓缩, 调整为等渗溶液后按照生物剂量使终浓度为0.5 g/ml, 经过滤除菌后4℃避光保存, 待用前用培养液稀释至所需浓度。

    1.2 细胞培养及分组 将PC12 细胞于90%DMEM+10%胎牛血清+1%双抗的培养液中, 置于37℃、95%空气+5%CO2的培养箱中培养, 1～2 d 更换培养液, 培养至单层细胞汇合后传代 ......