1.4.2 总RNA纯度及完整性的检测 紫外分光光度仪测定OD260/ OD280值在1.9～2.0之间，总RNA浓度约为230ng/μL；1.5%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的完整性，可见清晰较亮的28s、18s两条带，28s宽度约为18s的两倍，说明总RNA的完整性较好，符合后续实验的要求，如图1。

    1.5 反转录体系及反应条件

    模板总RNA进行65℃水浴5min变性后迅速冰上放置，同时按反转录试剂盒操作说明冰上配制反应混合液如下：5×PrimeScript Buffer 2μL，RT Enzyme Mix 0.5μL，Oligo dT Primer(50μM)0.5μL，Random 6mers(100μM)0.5μL，总RNA模板500ng，用Nuclease-Free水补足10μL反应体系。反应条件：37℃反应15mins，85℃灭活5s，-20℃保存备用。

    1.6 实时荧光定量PCR

    采用SYBR Green I 荧光嵌合法进行Real Time PCR。按照实时荧光定量试剂盒(SYBR Premix Ex Taq)操作说明冰上配制反应混合液如下：SYBR Premix Ex Taq 12.5μL ......