1.2.5 流式细胞仪检测培养心肌细胞的凋亡率 流式细胞仪采用FITC- Annexin- V/PI双染法进行细胞凋亡检测分析,流式细胞仪激发光波长用488nm,用一波长为515nm的通带滤器检测FITC(异硫氰酸荧光素)荧光,另一波长大于560nm的滤器检测PI(碘化丙啶)荧光。

    将心肌细胞培养48h后用0.25%胰蛋白酶消化,PBS洗涤2次,并调整细胞密度为1×106g/L,制成单细胞悬液,直接收集到10mL的离心管中,每样本细胞数为(1～5)×106/mL,1000r/min离心5min,弃去培养液。用孵育缓冲液洗涤1次,1000r/min离心5min。用100μl的标记溶液重悬细胞,室温下避光孵育15min。1000r/min离心5min沉淀细胞孵育缓冲液洗1次。加入荧光(SA-FLOUS)溶液4℃下孵育20min,避光并不时振动。在双变量流式细胞仪的散点图上,可同时描述三群不同状态细胞:左下象限FITC-/PI-细胞,即正常活力细胞;右下象限FITC+/PI-细胞,即凋亡细胞;右上象限FITC+/PI+细胞,即已死亡细胞。

    1.3 统计学分析

    实验数据计量资料用均数±标准差(χ±s)表示,采用SPSS12.0统计软件进行多组间单因素方差分析,P<0.05为有统计学意义 ......