糖尿病大鼠脑缺血再灌注脑组织BDNF表达及UPP阻断的影响(2)
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1.3.4 MCAO模型神经功能评分 根据Longa等[8]报道的神经功能缺陷5分制标准,待大鼠麻醉苏醒后进行神经功能评分。1～3分为模型制作成功。制作成功的大鼠进行下一步实验。不具备上述体征及术后未生存至预定时间点的大鼠被淘汰。
1.4 取材及免疫组化染色
各组根据不同亚组的再灌注时间点,将大鼠深麻醉,经4%多聚甲醛PBS缓冲液灌注固定后 ,断头取脑。取视交叉后 2mm 脑组织层面进行脱水、石蜡包埋、切片4μm。免疫组化采用标准SABC法,DAB显色,按试剂盒说明进行操作,免疫染色阴性对照采用PBS液代替I抗。在额顶叶皮质,用Image-pro Plus 5.0图文分析系统测定BDNF免疫阳性细胞计数。每张切片用高倍镜(×200)随机观测皮质到白质5个不重复视野,计算BDNF免疫阳性细胞计数。
1.5 统计学方法
所有数据以χ±s表示,成组设计多样本均数比较用one-way ANOVA方差分析,多样本均数间两两比较用LSD法,检验水准为(P = 0.05),应用SPSS11.5统计软件进行分析。
2 结果
2.1 脑梗死各组不同时间点神经功能评分比较
见表1。A组、B组无神经功能受损,C、D、E三组在MACO术前Longa评分差异无统计学意义。各缺血时间点上D组神经功能评分较其他各脑梗死组高,差异有显著性(P<0.05);E组的神经功能评分较C组、D组低,差异有显著性(P<0.05)。
2.2 免疫组化结果
免疫组化检测提示在A组中有BDNF阳性细胞(图中箭头所示)表达(见封三图1)。
BDNF免疫阳性细胞主要分布在皮层Ⅲ～Ⅴ层神经细胞,在缺血灶周围也有少量表达,胞浆和突起被染成棕黄色,主干树突和近细胞膜的胞浆处染色较深,而细胞核周围染色较浅。
各脑缺血组缺血2h再灌注后不同时间点BDNF的表达比较见表2。由表2可见,缺血再灌注6h后各组、各时间点上BDNF表达较正常对照组增加(P<0 ......
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