白花丹参对肺动脉高压大鼠肺组织VEGF表达的影响(2)
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1.6 Western blot法检测肺组织VEGF表达
组织总蛋白的提取及测量:取部分肺组织,充分剪碎,低温液氮研磨后,加到含蛋白酶抑制剂的裂解液中,4℃裂解40min,使其充分裂解,4℃ 12000r/min,离心30min,弃除沉淀,BCA蛋白定量测定法检测上清液蛋白含量。样品分装、贮存于-80℃中待用。Western blot:每份样本上样50μg,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳:100V电泳 1h。100mA湿法转印40min。室温封闭1h后,一抗1∶500(鼠抗鼠VEGF单克隆抗体)4℃孵育过夜,TTBS洗膜;二抗1∶2000室温孵育2h,TTBS洗膜,BCIP/NBT显色10min。凝胶成像采图,Quantity One软件进行灰度值分析。
1.7 统计学处理
所有的数据结果均采用均数±标准差(χ±s)表示,用SPSS12.0统计软件进行统计学分析,P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 动物的一般状况
实验前、造模前各组动物体重及一般情况无差别,毛发顺且有光泽。实验过程中,正常组体重明显增加,一般情况良好。模型组大鼠体重上升缓慢、进食减少、毛发枯糙无光泽、一般状况较差。给药组情况介于两者之间。
2.2 血流动力学检测结果
见表1。
2.3 光镜下病理观察结果
正常对照组:肺泡结构清晰,泡壁毛细血管无扩张充血,肺泡上皮完整,腔内无渗出物,间质少量炎症细胞浸润,肺小动脉血管壁无增厚,血管腔无狭窄;模型组;肺泡壁明显增厚,其上毛细血管扩张充血,肺泡腔内可见少量水肿液,肺组织有较多的炎症细胞浸润,肺小动脉血管壁明显增厚,中膜平滑肌层数增多,管腔明显狭窄、闭塞;给药组:肺泡壁有少量充血或炎性细胞浸润,肺泡无明显扩大,肺小动脉血管壁中度增厚,管腔缩小不明显 ......
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