应用锁核酸探针技术检测肿瘤样本中K-ras基因突变(2)
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1.2.5 测序 对SSCP发现有异常片段的DNA 随机抽取进行正反双向DNA 测序。同时针对LNA探针检测有突变的PCR产物进行克隆后测序确认。
2 结果
2.1 LNA探针检测和PCR-SSCP检测及测序结果
应用LNA探针荧光PCR方法检测,对照组样本均未发现K-ras基因12密码子突变。85例组织样本中,25例胃癌组织样本检出10例突变(40%),28例直肠癌样本中检出13例突变(46.4%),22例结肠癌样本中检出11例突变(50%),10例胰腺癌样本6例检出突变(60%)。97例肿瘤血浆样本中,30例胃癌血浆样本检出8例有突变(26.7%),32例直肠癌血浆样本检出11例有突变(34.4%),25例结肠癌血浆样本检出12例有突变(48%),10例胰腺癌血浆样本5例检出突变(50%)。随机测序结果表明LNA探针检测突变正确。突变型LNA探针检测结果如图1所示。
应用PCR-SSCP方法检测,对照组样本均未发现K-ras基因12密码子突变。85例组织样本中,25例胃癌组织样本检出9例突变(36%),28例直肠癌样本中检出11例突变(39.3%),22例结肠癌样本8例检出突变(36.4%),10例胰腺癌样本5例检出突变(50%)。97例肿瘤血浆样本中,30例胃癌血浆样本检出6例有突变(20%),32例直肠癌血浆样本检出8例有突变(25%),25例结肠癌血浆样本检出11例有突变(44%),10例胰腺癌血浆样本4例检出突变(40%)。随机测序结果表明SSCP方法检测突变正确 ......
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