1.2.3 流式细胞技术检测 采用间接免疫荧光标记法,上述方法诱导分化的神经元细胞悬液进行标记,取106细胞加特异的第一抗体,4℃温度下静置15～30min。一抗为小鼠抗小鼠GABA抗体。加缓冲液离心清洗2次后,吸尽残留液体,弹散沉淀,加入荧光标记的第二抗体,4℃静置30min。缓冲液离心清洗2次后,加入适量缓冲液进行流式细胞仪计数。

    1.2.4 RT-PCR检测 GABA能神经元重要分化调控基因引物(5'至3'排序)[6]:Viaat[572bp](TTCTGTCCTTTTCTCCCGCCCCGCCGCC;GCACCACCTCCCCGTCTTCGTTCTCCTC);Gad1[302bp] (CCTTCGCCTGCAACCTCCTCGAAC;GCGCAGTTTGCTCCTCCCCGTTCTT);Gad2[583bp](ACTCTGGCATTTCTACAAGATGTTATGA;GAATCACACTGTCTGTTCCAATCCCTA)。使用invitrogen试剂盒,反转录48℃,45min;预变性94℃,2min;变性94℃,30s;退火58℃,1min;延伸68℃,1min ......